胸腺素Β10抗体的应用

背景^[1-3]

胸腺素Β10抗体是可以特异性结合胸腺素Β10的一类多克隆抗体，主要用于检测胸腺素Β10的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中胸腺素Β10水平。用纯化的胸腺素Β10抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胸腺素Β10，再与HRP标记的胸腺素Β10抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胸腺素Β10呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中胸腺素Β10浓度。

胸腺素β10（Tβ10）是胸腺素β家族成员。与Tβ4一样,Tβ10也是与细胞运动有关的肌动蛋白隐蔽蛋白。研究发现Tβ10可能与某些肿瘤行为,如细胞增殖、细胞凋亡、血管生成、肿瘤转移等相关。

目前细胞中Tβ10作用的分子机制尚不明确。有研究表明,Tβ10有差别地表达于胚胎发生和神经发育过程中,在炎症及肿瘤发生时其表达量也有所上调,甚至过表达。研究表明Tβ10表达改变与乳腺癌、食管癌、肝癌、胆管癌、卵巢癌等恶性肿瘤关系密切。根据癌症类型的不同，Tβ10呈现出不同的表达状态，而且具体作用机制尚未明确。

应用^[4][5]

用于GRα调控Tβ10致猪骨骼肌细胞氧化应激的研究

应激反应导致机体内应激激素大量分泌,其中以皮质醇为主,它是影响肉质的一个较为重要的因素。课题组前期研究表明,在动物日粮饲喂过程中添加皮质醇会导致仔猪背最长肌肌肉组织受损严重,肌纤维间隙增大,凋亡细胞数增多。

但目前关于应激激素是如何影响肉质以及通过何种方式导致肉质发生变化的机制并不完全清楚。现今研究表明糖皮质激素(glucocorticoid,GC)主要通过细胞膜与体内糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor alpha,GRα)结合发挥一系列调控作用。

GRα靶基因的筛选干扰GRα后根据表达差异筛选GRα的靶基因,定量结果显示,干扰GRα后极显著下调Tβ10的表达,下调HSP90和HSP27的表达;且超表达GRα后Tβ10的表达显著升高,上调HSP90和HSP27的表达,且在网站上预测出GRα与Tβ10的结合位点。

因此推测Tβ10可能是GRα的靶基因,双荧光素酶报告和染色质免疫共沉淀等试验初步验证,结果表明Tβ10可能是GRα潜在的靶基因。构建Tβ10超表达载体后通过流式细胞仪检测Tβ10对PSC细胞凋亡的影响,结果表明:超表达Tβ10可以促进PSC细胞凋亡。

且通过检测细胞的氧自由基发现其含量显著升高,说明细胞处于氧化应激状态。通过qPCR实验检测Tβ10对细胞应激与凋亡调控相关基因的影响,结果表明:超表达Tβ10能促进PSC细胞中BAX、HSP90、HSP27和CAST的表达。

参考文献

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[2]Astragalus Polysaccharide Suppresses 6-Hydroxydopamine-Induced Neurotoxicity in Caenorhabditis elegans[J].Haifeng Li,Ruona Shi,Fei Ding,Hongyu Wang,Wenjing Han,Fangli Ma,Minghua Hu,Chung Wah Ma,Zebo Huang,Renata Szymanska.Oxidative Medicine and Cellular Longevity.2016

[3]Corticosteroids[J].Sivapriya Ramamoorthy,John A.Cidlowski.Rheumatic Disease Clinics of North America.2016(1)

[4]Polysaccharopeptide exerts immunoregulatory effects via MyD88-dependent signaling pathway[J].Zifang Feng,Zhixue Wang,Min Yang,Lijing Zhou,Yixi Bao.International Journal of Biological Macromolecule.2015

[5]牛红丹.GRα调控Tβ10致猪骨骼肌细胞氧化应激的研究[D].华中农业大学,2018.