辽东楤木皂苷X的含量测定

发布日期:2020/7/27 12:33:26

背景及概述^[1]

楤木，又称楤木白皮，为五加科楤木属植物楤木AraliachinensisL.的根皮，具有祛风湿，利小便，散瘀血，消肿毒的功效。五加科楤木属植物国产30余种，入药常见的有辽东楤木Araliaelata(Miq.)Seem.黄毛楤木，太白楤木等。其有效部位为楤木皂苷类，具有抗肿瘤、强壮、增强免疫、抗病毒等作用。辽东楤木皂苷X便是楤木皂苷种的一种。

含量测定^[1]

1仪器与试药

戴安高效液相色谱仪（P680A四元低压梯度泵，PDA-100二极管阵列检测器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）。辽东楤木3批，1批购自安徽亳州中药材市场，产地辽宁；2批购自哈尔滨，产地黑龙江哈尔滨；经由泸州医学院生药教研室税丕先鉴定为辽东楤木的根皮。楤木皂苷X对照品购自南京泽朗医药科技有限公司。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1溶液的制备

精密称取楤木皂苷X对照品2.40mg，加35％乙腈10ml制成0.24mg/ml的对照品溶液。精密称取药材细粉（过60目筛）0.2g，加20ml甲醇，超声提取20min，过滤，少量甲醇洗涤，合并滤液，水浴挥干甲醇，加35％乙腈溶液洗涤，合并洗涤液，定容至10ml，即得供试品溶液。

2.2色谱条件及系统适用性

色谱柱：KromasilC18柱（250mm×4.6mm5μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（35∶65）；检测波长203nm；柱温30℃；流速0.8ml/min；进样量：10μl。分别精密吸取上述对照品溶液，供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图（附图）。楤木皂苷X与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数以楤木皂苷X峰计大于1×10⁴，溶剂无干扰。

2.3线性关系考察

精密吸取“2.1”项下对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积A对进样量C（μg）进行回归，回归方程为：A＝4.2869C-0.2929，r＝0.9999。楤木皂苷X在0.60～4.80μg范围内与峰面积具有良好的线性关系（r＝0.9999）。

2.4精密度试验

取对照品溶液10μl，按上述色谱条件连续进样6次，记录楤木皂苷X的峰面积，其RSD为1.48%。表明仪器精密度良好。在不同日期由不同分析人员按“2.1”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液。按“2.2”项的方法试验，记录楤木皂苷X的峰面积，其RSD为1.79%。

2.5稳定性、重复性、耐用性试验

取“2.1”项下供试品溶液，于制备后0，4、8、12、24、36h进样10μl，记录楤木皂苷X的峰面积，其RSD为2.03％，表明供试品溶液在36h内较稳定。取同一批药材，按“2.1”项下方法分别制得6份供试品溶液，进样测定，楤木皂苷X的含量为5.65％，其RSD为1.87％。表明上述方法重复性良好。采用KromasilC18柱（250mm×4.6mm5μm）和DiamonsilC18柱（200mm×4.6mm5μm）两种色谱柱，并用戴安高效液相色谱仪和JL99-030A(意大利BioTek公司)高效液相色谱仪，测定同一批样品，峰形和柱效均良好，测定结果基本一致，说明所用方法耐用性良好。

2.6加样回收试验

精密称取已知含量（5.65%）的楤木药材（批号：110301）9份，每份0.1g，分成3组，每组3份，分别精密添加楤木皂苷X对照品储备液（2.827mg/ml）1.6、2.0、2.4ml，照“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，计算平均加样回收率，见表1。结果表明，上述方法具有良好的回收率。