酪蛋白抗体的应用

背景^[1-3]

酪蛋白抗体是可以特异性结合酪蛋白的一类多克隆抗体，主要用于检测酪蛋白的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，对酸敏感，pH较低时会沉淀。酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质，又称：干酪素、酪朊、乳酪素。

α-酪蛋白是哺乳动物的主要蛋白，人乳中没有α-酪蛋白，以β-酪蛋白为主要酪蛋白形式。酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源，也是钙和磷的来源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。

酪蛋白是乳中含量最高的蛋白质，龋齿，防治骨质疏松与佝偻病，促进动物体外受精，调节血压，治疗缺铁性贫血、缺镁性神经炎等多种生理功效，尤其是其促进常量元素（Ca、Mg）与微量元素（Fe、Zn、Cu、Cr、Ni、Co、Mn、Se）高效吸收的功能特性使其具有“矿物质载体”的美誉，它可以和金属离子，特别是钙离子结合形成可溶性复合物，一方面有效避免了钙在小肠中性或微碱性环境中形成沉淀，另一方面还可在没有VD参与的条件下使钙被肠壁细胞吸收，所以CPPs是最有效的促钙吸收因子之一，它的发现为补钙制品的研发提供了一种新方法。

酪蛋白为非结晶、非吸潮性物质，常温下在水中可溶解0.8-1.2%，微溶于25℃水和有机溶剂，溶于稀碱和浓酸中，能吸收水分，当浸入水中则迅速膨胀，但分子不结合。

应用^[4][5]

用于牛乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的检测

建立准确、灵敏、简便的检测β-酪蛋白的方法，以此来衡量体外培养乳腺细胞的生理功能及分化状态。同时为在细胞水平上研究不同激素对酪蛋白表达调控、乳腺特异性表达载体的评价等相关研究提供有力的手段。

用牛β-酪蛋白（纯度90%以上）免疫新西兰大白兔，获得兔抗牛β-酪蛋白多克隆抗体，经双向琼脂扩散检测其效价为1:32，并通过免疫印迹方法验证其为β-酪蛋白特异性抗体。建立了β-酪蛋白在蛋白水平及转录水平的检测方法。在蛋白水平上，利用所获得的抗体，建立了检测β-酪蛋白的ELISA方法。

并比较了双抗夹心ELISA方法和间接竞争ELISA方法，实验结果显示，双抗夹心ELISA方法的灵敏度达10ng/ml，间接竞争ELISA方法的灵敏度达150ng/ml左右。相比较而言，双抗夹心ELISA方法灵敏度更高，方法更简便。

在转录水平，利用所合成的β-酪蛋白引物，建立了RT-PCR检测β-酪蛋白的方法。应用双抗夹心ELISA方法和RT-PCR方法，检测到了从牛初乳中分离的乳腺上皮细胞中的β-酪蛋白。

应用上皮细胞特异蛋白角蛋白18单克隆抗体，对体外培养的乳腺上皮细胞进行鉴定。结果呈阳性，证明所建细胞系具有乳腺上皮细胞特性。

β-酪蛋白的表达必须通过包括促乳素在内的激素诱导，在实验中，尝试了应用促乳素、胰岛素和糖皮质激素对实验室建立的体外培养的牛乳腺上皮细胞系进行激素诱导，并通过建立的方法对其中的β-酪蛋白进行检测。但是未在此细胞系中检测到β-酪蛋白。

参考文献

[1] Establishment and characterization of bovine mammary epithelial cell lines[J].C.Anne Gibson,Juan R.Vega,Craig R.Baumrucker,Cori S.Oakley,Clifford W.Welsch.In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal.1991(7)

[2] Estimation of Aflatoxin Levels in Selected Foods and Feeds in India.D.V.R.Reddy,K.Thirumala Devi,S.V.Reddy,F.Waliyar..2000

[3] Penninger,and Young-Yun Kong.Osteoprotegerin Ligand Inducesβ-casein Gene Expression through the Transcription Factor CCAAT/Enhancer-binding Proteinβ.Hyun-Ju Kim,Mi-Jeong Yoon,Jinie Lee,Josef M.Journal of Biological Chemistry.2002

[4] 牛乳β-酪蛋自检测的ELISA方法[J].李震,陈永福.山东农业大学学报.1999(04)

[5]张月云.牛乳腺上皮细胞中β-酪蛋白的检测[D].新疆农业大学,2004.