脂肪酰辅酶A还原酶2抗体的应用

背景^[1-3]

脂肪酰辅酶A还原酶2抗体是可以特异性结合脂肪酰辅酶A还原酶21的一类多克隆抗体，主要用于检测脂肪酰辅酶A还原酶2的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中脂肪酰辅酶A还原酶2水平。用纯化的脂肪酰辅酶A还原酶2抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂肪酰辅酶A还原酶2，再与HRP标记的脂肪酰辅酶A还原酶2抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂肪酰辅酶A还原酶2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中脂肪酰辅酶A还原酶2浓度。

脂肪酰基辅酶A还原酶2属于脂肪酰基辅酶A还原酶家族。主要表达在眼睑的睑板腺和皮肤的皮脂腺。大脑中也有表达并合成了大量的醚脂。其生物学功能包括脂质代谢过程，长链脂肪酰基辅酶A代谢过程以及蜡酯生物合成过程等。脂肪酰基辅酶A还原酶2参与蜡酯生物合成的步的还原酶蛋白编码，利用C16或C18饱和脂肪酸作为底物，将脂肪酸转化为脂肪醇。

应用^[4][5]

用于白蜡虫脂酰辅酶A还原酶基因（EpFAR）的克隆表达与功能研究

白蜡虫（Ericerus pela Chavanness）是我国特有的一种资源昆虫,由于它能分泌性质优异的虫白蜡,在中国已经被人工养殖上千年,虫蜡主要用于蜡染、蜡烛、刻板模印、中药等行业。

虫白蜡是以高级饱和一元酸和高级饱和一元醇所构成的酯类为主要成分。酰基还原途径是生物体内蜡酯合成的主要途径之一,即脂酰辅酶A（fatty acyl-CoA）在脂酰辅酶A还原酶（fatty acyl-CoAreductase,FAR）的作用下还原生成脂肪醇,脂肪醇和脂酰辅酶A在蜡酯合酶（wax synthase,WS）的作用下生成酯。前期研究表明白蜡虫fatty acyl-CoA reductase（EpFAR）基因是与泌蜡密切相关的基因之一。

采用分子生物学的相关技术方法,首先克隆获得白蜡虫EpFAR基因,明确了白蜡虫EpFAR基因的序列特征,分析该基因在虫体内各组织的转录水平和编码蛋白的表达谱,进一步在培养的昆虫细胞中表达EpFAR蛋白,通过检测EpFAR酶的生物反应产物明确基因EpFAR的功能。

获得的主要结果如下:1白蜡虫EpFAR序列特征与系统发育本文在课题组前期研究得到的转录组数据分析基础上,选择其中的脂酰辅酶A还原酶基因序列片段,采用RACE扩增技术,克隆得到了EpFAR基因的3’端和5’端序列,经DNAMAN软件拼接后,上传至NCBI在线比对,与其他生物的脂肪酰辅酶A还原酶基因同源,证明所得的基因为白蜡虫的脂肪酰辅酶A还原酶基因,获得了该基因全长cDNA,命名为EpFAR。

基因EpFAR开放阅读框长1569 bp,共编码522个氨基酸,分子量为60.3kDa,该基因具有典型的FAR基因的特征,属于SDR superfamily成员,属于NADBRossmann superfamily成员,FARC superfamily成员。

在其氮端具有特异的FAR-NSDRe结构域（22-353aa）,NADbinding4结构（26-297 aa）,以及Extended SDRs所有的典型的辅因子结合基序TGXXGXXG（24-34aa）,Classical SDRs所具有的活性位点基序YXXXK（216-220aa）,在其碳端具有特异的FARC结构域（387-477）,Sterile结构（388-479aa）。

该基因所具有的保守结构域表明该基因序列较为复杂,可能参与复杂的代谢途径,发挥不同的分子功能。

参考文献

[1]Identification and characterization of a fatty acyl reductase from a S podoptera littoralis female gland involved in pheromone biosynthesis[J].G.Carot‐Sans,L.Mu?oz,M.D.Piulachs,A.Guerrero,G.Rosell.Insect Mol Biol.2015(1)

[2]The fatty acyl-CoA reductase Waterproof mediates airway clearance in Drosophila[J].Martin H.J.Jaspers,Ralf Pflanz,Dietmar Riedel,Steffen Kawelke,Ivo Feussner,Reinhard Schuh.Developmental Biology.2014(1)

[3]Within-population variability in a moth sex pheromone blend:genetic basis and behavioural consequences[J].Astrid T.Groot,Gerhard Sch?fl,Ollie Inglis,Susanne Donnerhacke,Alice Classen,Antje Schmalz,Richard G.Santangelo,Jennifer Emerson,Fred Gould,Coby Schal,David G.Heckel.Proceedings of the Royal Society B:Biological Sciences.2014(1779)

[4]Tissue‐specific expression of the pheromone gland‐specific fatty acyl reductase gene in O strinia scapulalis[J].Binu Antony,Yukio Ishikawa.Entomol Exp Appl.2013(1)

[5]胡艳红.白蜡虫脂酰辅酶A还原酶基因（EpFAR）的克隆表达与功能研究[D].南京林业大学,2018.