人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)水平。用纯化的人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入12羟二十烷四烯酸(12-HETE)，再与HRP标记的12羟二十烷四烯酸(12-HETE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的12羟二十烷四烯酸(12-HETE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)的浓度。

ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。

应用^[4][5]

人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA KIT用于血浆12-HETE水平在预测ICU危重患者并发脓毒症中的价值初探研究。

脓毒症小鼠模型中血浆12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)的变化,了解重症加强护理病房(ICU)危重患者血浆12-HETE水平;分析12-HETE与传统生物标志物及临床危重症评分之间的相关性;初步探讨12-HETE在预测ICU危重患者并发脓毒症中的临床价值。方法:1.60只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为对照组、LPS组和Feces组3组,每组20只。腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg制备LPS诱导的脓毒症小鼠模型;对照组腹腔注射与其它组等量磷酸盐缓冲液(PBS);Feces组腹腔注射小鼠粪便60mg/kg。给药后连续观察小鼠精神、活动状况、呼吸频率、进食饮水等情况,各组分别于制模6h、12h、24h、48h取血并处死小鼠;使用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法来检测血浆12-HETE水平。采集患者血液样本并测定其血浆12-HETE水平,对照组血液样本来自于健康体检者,研究组患者在入住ICU后采集患者血液样本,同时收集符合纳入标准研究对象的基线资料、生命体征、血常规、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)等实验检查结果以及GCS、APACHEⅡ、SOFA等临床评分系统的分值等临床资料;观察并记录患者整个病程中脓毒症的发生情况。使用统计学专业软件对相关临床资料进行了t检验、方差分析、c~2检验、Spearman相关性分析、绘制相关受试者工作特征曲线(ROC),评估12-HETE在预测脓毒症发生中的临床价值。

参考文献

[1]Emerging role of 12/15-Lipoxygenase(ALOX15)in human pathologies[J].Nikhlesh K.Singh,Gadiparthi N.Rao.Progress in Lipid Research.2018

[2]Role of the 12-Lipoxygenase Pathway in Diabetes Pathogenesis and Complications[J].A.D.Dobrian,M.A.Morris,D.A.Taylor-Fishwick,T.R.Holman,Y.Imai,R.G.Mirmira,J.L.Nadler.Pharmacology and Therapeutics.2018

[3]Baicalein induces the apoptosis of HCT116 human colon cancer cells viathe upregulation of DEPP/Gadd45a and activation of MAPKs[J].Meng-Qi Su,Yi-Ran Zhou,Xuan Rao,Hong Yang,Xin?Hao Zhuang,Xue-Jia Ke,Guang-Yong Peng,Chang-Lin Zhou,Bai-Yong Shen,Jie Dou.International Journal of Oncology.2018(2)

[4]Baicalein inhibits osteosarcoma cell proliferation and invasion throughthe miR?183/Ezrin pathway[J].Jian Zhang,Wei Yang,You?Bing Zhou,Yong?Xiao Xiang,Lu?Shan Wang,Wen?Kai Hu,Wen?Jun Wang.Molecular Medicine Reports.2018(1)

[5]黄祺.血浆12-HETE水平在预测ICU危重患者并发脓毒症中的价值初探[D].遵义医科大学,2019.