人重组激活基因2(RAG-2)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人重组激活基因2(RAG-2)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人重组激活基因2(RAG-2)水平。用纯化的人重组激活基因2(RAG-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入重组激活基因2(RAG-2)，再与HRP标记的重组激活基因2(RAG-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的重组激活基因2(RAG-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人重组激活基因2(RAG-2)浓度。

重组激活基因(recombination—activating genes， Rags)在V(D)J重组过程中发挥重要作用，V(D)J重组过程中发生的免疫球蛋白基因和T细胞受体 fTCR)基因的重排和重组是B细胞和T淋巴细胞成熟过程中的必需阶段 。人重组激活基因1(Rag1) 和人重组激活基因2(Rag2)均位于2号染色体，其编码的人重组激活基因1和人重组激活基因2蛋白在成熟前T细胞发育成为成熟T细胞以及成熟前B细胞发育成为成熟B细胞的过程中，通过识别Ig 或 TCR基因，并结合基因片段中的重组信号序列(RSS）启动 V(D)J重组。人重组激活基因l和人重组激活基因2在淋巴细胞 V(D)J重排过程中缺一不可，任意一个缺失都会导致 T、B淋巴细胞发育中断，表现为严重的T／B细胞早期发育阻滞。因外周血中没有成熟 T／B淋巴细胞，导致机体产生与人 “重症联合免疫缺陷症”(severe combined immunodeficiency。SCID)类似的症状。

应用^[4]

人重组激活基因2(RAG-2)ELISA KIT用于CD8~+T细胞/IL-33/ILC2s途径加重Con A诱导的T细胞过继转移Rag2 KO小鼠急性肝炎的作用及机制研究。

CD4+T细胞在这种小鼠肝病模型中发挥最主要的致病性作用,同时NK细胞、NKT细胞、γδT细胞、Treg细胞等细胞也可通过细胞杀伤作用、分泌细胞因子参与疾病过程。此前有研究显示,在Con A诱导的小鼠肝炎模型中,颗粒酶（Perforin）可明显加重肝炎病理表现,但Perforin的主要来源尚且不明,而对于CD8+T细胞在Con A诱导的肝炎中的作用目前鲜有文献报道,机制不明。在本实验室前期研究发现,损害相关模式分子（DAMPs）高迁移率族蛋白1（HMGB1）和白细胞介素-33（IL-33）作为内源性的炎症警报素,在Con A诱导的小鼠肝炎中发挥重要作用。其中IL-33由受损伤的肝细胞产生,可促进肝炎的病理过程和二型固有淋巴细胞的免疫反应。

通过肝细胞/IL-33/ILC2s途径参与小鼠Con A诱导的自身免疫性肝炎的发病过程,并阐明其机制。方法:1.野生型C57BL/6小鼠和Rag2 KO小鼠构建Con A诱导的小鼠急性肝炎:（1）C57BL/6小鼠经尾静脉注射Con A（15mg/kg）,注射后第10小时处死小鼠,同时收集实验所需组织样本;（2）Rag2缺失的小鼠(Rag2-/-)经尾静脉单独或联合过继转移CD4+T细胞、NKT细胞、γδT细胞或CD8+T细胞,1小时后注射Con A,10小时后处死小鼠并收集实验所需组织样本;2.小鼠原代肝细胞体外培养以及与淋巴细胞混合培养:小鼠处死后用两步法取原代肝细胞并在体外培养3天后,与淋巴结来源的淋巴细胞混合培养。培养1小时后加Con A或IL-33进行刺激;3.小鼠肝脏组织HE染色、TUNEL染色以及血清ALT检测,评估小鼠肝脏的病理学改变。

参考文献

1.王敏. 人类重组激活基因-2表达研究[D].吉林大学,2008.

2.李海飞. 大米过敏原RAG2的基因表达及其抗体的制备与应用[D].南昌大学,2016.

3.刘芳遐. 人肝源性干细胞在Fah~(-/-)Rag2~(-/-)小鼠中生物学行为的研究[D].第二军医大学,2010.

4.张圆月. CD8~+T细胞/IL-33/ILC2s途径加重Con A诱导的T细胞过继转移Rag2 KO小鼠急性肝炎的作用及机制[D].华中科技大学,2019.