人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)水平。用纯化的人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)，再与HRP标记的人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)浓度。载脂蛋白A1是载脂蛋白的一类，载脂蛋白是血浆脂蛋白中的蛋白质部分，能够结合和运输血脂到机体各组织进行代谢及利用的蛋白质。

Apo A1（载脂蛋白A1）是高密度脂蛋白（HDL）的主要结构蛋白，约占HDL颗粒的65%，分子量为28300。在小肠和肝脏合成，少量在肾和性腺合成，通过肾脏降解。po A1逆向转运胆固醇至肝脏，具有抗-动脉粥样硬化作用。APOA1是HDL的主要载脂蛋白，影响其血浆水平同HDL。ApoAI：正常人群血清apoAI水平多在1.2～1.6g/L范围内，女性略高于男性。HDL颗粒的蛋白质成分(载脂蛋白)约占50％，蛋白质中apoAI约占65％～75％，其他脂蛋白极少，所以血清apoAI可以反映HDL水平，与HDL-C呈明显正相关，其临床意义也大体相似。但是，HDL是一系列e79fa5e98193e4b893e5b19e31333366303665颗粒大小与组成不均一的脂蛋白，病理状态下HDL亚组分及其组成成分常会发生变化，故apoAI的升、降也可能与HDL-C变化不完全一致。

应用^[4][5]

人抗载脂蛋白抗体A1(APO A1)ELISA KIT用于ABCA1介导载脂蛋白A1调节巨噬细胞炎症反应及其机制研究。

载脂蛋白A1（apolipoproteinA-Ⅰ,apoA-Ⅰ）是血浆高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）的主要成分，参与体内胆固醇逆向转运（reverse cholesterol transport,RCT），因此具有抗As的作用。近来研究发现，HDL/apoA-Ⅰ除了参与RCT外，还具有显著的抗炎效应，其机制研究对于明确As的慢性炎症疾病特点及其防治具有重要意义。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)是以ATP为能源，促进细胞内游离胆固醇（free cholesterol，FC）和磷脂流出并转运至贫脂apoA-Ⅰ，从而调节细胞内胆固醇平衡的一种整合膜蛋白。培养THP-1细胞株，用160nmol/L的佛波酯（phorbol12-myristate13-acetate，PMA）刺激细胞12h，使其诱导分化为巨噬细胞，并以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，oxLDL）孵育细胞使其转化为THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞。以HDL（30μg/ml）及其主要成分apoA-Ⅰ（10μg/ml）、载脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）（10μg/ml）、卵磷脂（phosphatidyl-choline,PC）（25μg/ml）和胆固醇（cholesterol,CHO）（50ng/ml）分别预处理细胞3h后，用LPS（10ng/ml）处理细胞6h，采用免疫印迹实验(western blotting)和酶联免疫吸附法（ELISA）法检测肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）、单核细胞趋化因子1（monocyte chemotactic factor,MCP-1）、干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）、IL-6和环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）的表达。

参考文献

[1]Monoclonal antibodies targeting IL-1 beta reduce biomarkers of atherosclerosis in vitro and inhibit atherosclerotic plaque formation in Apolipoprotein E-deficient mice[J].Vinay Bhaskar,Johnny Yin,Amer M.Mirza,Dan Phan,Sandra Vanegas,Hassan Issafras,Kristen Michelson,John J.Hunter,Seema S.Kantak.Atherosclerosis.2011(2)

[2]Associations of the ATP-binding cassette transporter A1 R219K polymorphism with HDL-C level and coronary artery disease risk:A meta-analysis[J].Xiang-yu Ma,Jian-ping Liu,Zhi-yuan Song.Atherosclerosis.2011(2)

[3]Neutrophil Activation Is Attenuated by High-Density Lipoprotein and Apolipoprotein A-I in In Vitro and In Vivo Models of Inflammation[J].Andrew J.Murphy,Kevin J.Woollard,Andreas Suhartoyo,Roslynn A.Stirzaker,James Shaw,Dmitri Sviridov,Jaye P.F.Chin-Dusting.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2011(6)

[4]The Evolving Role of HDL in the Treatment of High-Risk Patients with Cardiovascular Disease[J].H.Bryan Brewer.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2011(5)

[5]尹凯.ABCA1介导载脂蛋白A1调节巨噬细胞炎症反应及其机制[D].南华大学,2012.