B细胞迁移基因1抗体的应用

背景^[1-3]

B细胞迁移基因1抗体是一类可以特异性结合B细胞迁移基因1的多克隆抗体，主要用于检测B细胞迁移基因1的免疫组化、ELISA等实验。B淋巴细胞亦可简称B细胞，来源于骨髓的多能干细胞。B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝（胚胎小鼠14天或通顺儿8-9周）的造血细胞岛（island of hematopoietic cells）中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。

B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫（humoralimmunity）。在肿瘤发展过程中，细胞进入循环系统的能力是重要的研究对象。相关的信号通路主要可以分为控制细胞黏附和控制细胞骨架。细胞的迁移与侵袭主要与细胞骨架和黏附相关。肿瘤细胞侵袭和迁移能力的改变通常采用Transwell进行检测。

细胞划痕也是测定肿瘤细胞运动特性的方法，由于无法区别正常增殖和迁移细胞，应用有局限性。策略B cell translocation gene1(BTG1)属于BTG/TOB家族成员，该家族的成员在蛋白结构上具有高度同源性，并在细胞增殖和周期进程中发挥关键性的调节作用目前已报道该家族其它成员广泛参与细胞辐射应答过程，但尚未见BTG1基因在辐射应答过程中的作用和是否能够用于辐射增敏的研究BTG1基因作为抗增殖基因已被证实能够在多种细胞中发挥抗增殖作用，并广泛参与细胞增殖周期凋亡发育及分化等多种细胞生命活动过程

应用^[4][5]

用于BTG1基因在乳腺癌中的生物学功能及其机制的研究

研究BTG1基因高表达对乳腺癌细胞的生长增殖、凋亡和浸润、转移、和放射敏感性影响及其相关作用机制,为BTG1作为新的预测乳腺癌发生和转移的新分子标志物、基因治疗的新靶点和在放射治疗调节中的作用提供临床前的理论基础和实验依据。

方法:1、参照GeneBank中BTG1的基因序列,通过自行设计并扩增得到BTG1基因cDNA的引物一对,并构建携带人类全长BTG1 cDNA的pcDNA-BTG1真核表达载体;

2、应用阳离子脂质体Lipofactamin2000介导将pcDNA-BTG1质粒转染到乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中,通过在含G418的培养基中培养筛选获得耐G418的克隆,最后采用RT-PCR和Western Blot法检测细胞克隆中BTG1的mRNA和蛋白表达水平,并对细胞的遗传稳定性进行鉴定。

3、MTT法检测细胞的增殖活性;流式细胞仪法检测细胞周期分布和磷脂酰丝氨酸外翻法检测凋亡;Western blot方法检测细胞周期调控蛋白、凋亡相关蛋白表达变化。

4、细胞划痕法观察细胞体外迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力;Western blot检测细胞浸润转移相关蛋白的表达变化。

参考文献

[1]Single cell optical transfection[J].David J.Stevenson,Frank J.Gunn-Moore,Paul Campbell,Kishan Dholakia.Journal of the Royal Society Interface.2010(47)

[2]Bax is upregulated by p53 signal pathway in the SPE B-induced apoptosis[J].Wei-Ting Lee,Chia-Wen Chang.Molecular and Cellular Biochemistry.2010(1)

[3]Persistently Activated Stat3 Maintains Constitutive NF-κB Activity in Tumors[J].Heehyoung Lee,Andreas Herrmann,Jie-Hui Deng,Maciej Kujawski,Guilian Niu,Zhiwei Li,Steve Forman,Richard Jove,Drew M.Pardoll,Hua Yu.Cancer Cell.2009(4)

[4]XRCC1 gene polymorphisms and breast cancer risk in different populations:A meta-analysis[J].Huihua Li,Tam Cam Ha,Bee Choo Tai.The Breast.2009(3)

[5]朱然.BTG1基因在乳腺癌中的生物学功能及其机制的研究[D].苏州大学,2011.