B细胞迁移基因4抗体的应用

背景^[1-3]

B细胞迁移基因4抗体是一类可以特异性结合B细胞迁移基因4的多克隆抗体，主要用于检测B细胞迁移基因4的免疫组化、ELISA等实验。B细胞迁移基因4基因编码的蛋白质是BTG/Tob家族的成员。该家族具有似乎具有抗增殖特性的结构相关蛋白，这种编码的蛋白可以诱导G1在细胞周期停滞。

BTG4（BTG抗增殖因子4）是一种蛋白质编码基因。在其相关的途径中，有依赖于腺苷酸化的mRNA衰减。该基因的重要旁系同源物是BTG3。在体细胞中,BTG/TOB(B-cell translocation gene/TransducerofERBB2)抗增殖蛋白家族作为桥接蛋白,在介导CCR4-NOT复合体调节mRNA去腺苷酸化及随后的降解过程中发挥着重要的作用。

虽然BTG/TOB蛋白家族对mRNA去腺苷酸化具有重要功能,但是已经报道的五个成员(Tob1、Tob2、Btg1、Btg2、Btg3)的基因敲除鼠都具有正常的生存能力和生育力。另外,根据已经发表的基因表达数据库,相比于这五个成员Btg4(B-cell translocation gene 4)特异性高表达在小鼠卵母细胞和早期胚胎中。

Btg4敲除不影响小鼠的生存能力和雄鼠的生育能力,但导致雌鼠不育。Btg4缺失并不影响雌鼠的排卵和卵母细胞的成熟,但母源Btg4敲除却导致早期胚胎发育阻滞。借助于高通量转录组测序,Btg4敲除后,GV期卵母细胞没有明显的差异,而MII期卵母细胞和合子的转录组发生的明显差异。

应用^[4][5]

用于Btg4在小鼠卵母细胞和早期胚胎发育过程中的重要作用研究

通过TALEN技术得到全身敲除卵母细胞中高都表达的基因——Btg4-/-的小鼠。得到的Btg4-/-小鼠雌性不育。

通过组织形态学发现Btg4-/-卵母细胞在卵巢中的发育情况正常；通过卵母细胞体外培养、MII期卵母细胞免疫荧光染色和MII期卵母细胞染色体铺片来具体分析Btg4-/-卵母细胞的减数分裂进程,发现Btg4-/-卵母细胞能够正常进行减数分裂停滞在MII期,并且小鼠正常排卵；之后,收集的各个时期的胚胎,发现Btg4-/-的卵母细胞受精后,胚胎停滞在受精卵时期。

并通过免疫荧光染色分析发现受精卵中的原核不破裂,减数分裂不能向有丝分裂的转换。逆转录受精卵mRNAs成cDNA,Realtime分析发现,Btg4-/-的卵母细胞在受精后,细胞质中的mRNA没有正常降解。并且,也通过单细胞RNA测序证实了该结果。

通过IP实验发现BTG4能和CCR-NOT复合体中的重要催化亚基CNOT7相互结合。并且通过体外去腺苷酸化实验证实了BTG4能够增强CNOT7的去腺苷酸活性。

结果：1.Btg4是一个典型的母源效应基因,Btg4-/-小鼠雌性不育。

2. Btg4敲除后对卵子发生,减数分裂和受精没有影响。

3. Btg4-/-的卵母细胞在受精后,胚胎阻滞在受精卵阶段,原核核膜不破裂。4.BTG4可能通过CCR4-NOT复合体去腺苷酸介导的降解mRNAs的途径来调节母源mRNAs的降解。

参考文献

[1]A Subcortical Maternal Complex Essential for Preimplantation Mouse Embryogenesis[J].Lei Li,Boris Baibakov,Jurrien Dean.Developmental Cell.2008(3)

[2]CDC2A(CDK1)-mediated phosphorylation of MSY2 triggers maternal mRNA degradation during mouse oocyte maturation[J].Sergey Medvedev,Juxiang Yang,Norman B.Hecht,Richard M.Schultz.Developmental Biology.2008(1)

[3]Selective degradation of transcripts during meiotic maturation of mouse oocytes[J].You-Qiang Su,Koji Sugiura,Yong Woo,Karen Wigglesworth,Sonya Kamdar,Jason Affourtit,John J.Eppig.Developmental Biology.2006(1)

[4]Calcium Elevation at Fertilization Coordinates Phosphorylation of XErp1/Emi2 by Plx1 and CaMK II to Release Metaphase Arrest by Cytostatic Factor[J].Junjun Liu,James L.Maller.Current Biology.2005(16)

[5]周剑杰.Btg4在小鼠卵母细胞和早期胚胎发育过程中的重要作用[D].浙江大学,2015.