牛磺熊去氧胆酸的含量检测和制备

背景及概述^[1]

牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholicacid)是熊胆汁的主要有效成分，也是人工合成熊胆的主要成分，广泛存在于人和多种动物胆汁中的一种结合型胆汁酸，有着多种生理药理作用，该药及其制剂在国外已有二十年的上市临床经验，主要用于固醇性胆囊结石、胆汁郁积性肝病(如：原发性胆汁性肝硬化)、胆汁反流性胃炎、自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、慢性肝炎(乙肝、丙肝等)、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、药物性肝损害、肝移植术前后预防及治疗并发症等。该药于1992年由BruschettiniS.R.L意大利贝斯迪大药厂首次注册上市，2007年获准在中国销售。

制备^[1-2]

报道一、

一种牛磺熊去氧胆酸钠的制备方法，包括：

(1)10g熊去氧胆酸原料(25.5mmol)，2.7g三乙胺(26.5mmol)溶于丙酮100ml溶液中，冷却至-5～-10℃，向溶液中滴加2.9g氯甲酸乙酯(25.97mmol)，滴加完毕后继续在-5～-10℃搅拌20min，过滤除去三乙胺盐，滤液备用；

(2)牛磺酸缩合反应

将牛磺酸4g(31.875mmol)溶于22ml1mol/L碳酸钠溶液中，滴加到前项所得混合酸酐溶液中，在20～30℃下30min内均速添加完毕，快速搅拌3h-4h，滤除沉淀，滤液备用；

(3)调酸与浓缩干燥

上述滤液用2mol/LHCL溶液调pH6-7，回收蒸干溶液，80℃下继续减压抽干，得牛磺熊去氧胆酸干燥物；所述的减压抽干可以选取的温度范围为70℃～90℃，本方法中选取80℃；

报道二、

高纯度的牛磺熊去氧胆酸的制备

a)牛磺熊去氧胆酸粗品的制备，按以下步骤进行：

在反应釜中，加入4.0KG熊去氧胆酸，加入19KG丙酮，搅拌下加入三乙胺1650ml，开启夹套制冷，将混合液的温度降至-10℃。流加氯甲酸乙酯1120ml，控制氯甲酸乙酯的加入速度，使得反应液温度维持在-5-0℃之间，30分钟时加完，继续维持温度搅拌反应40分钟，制得熊去氧胆酸与氯甲酸乙酯的混合酸酐，将上述混合酸酐反应液通过过滤器用氮气压滤至装有4.2KG纯化水，1.4KG牛磺酸，0.4KG氢氧化钠的50升反应釜中，充分搅拌反应3小时，进一步制得牛磺熊去氧胆酸粗品4.0KG。

b)牛磺熊去氧胆酸粗品的精制，按以下步骤进行：

(1)将4.0KG牛磺熊去氧胆酸投入50L反应釜中，加入4KG水和580ml丙酮，，加热搅拌至全部溶解；

(2)搅拌下冷却至-5-0℃，析晶30小时；

(3)放料至过滤器中抽滤，抽干后用冰水(-3-0℃)淋洗滤饼，再次抽干，得牛磺熊去氧胆酸3.3KG(纯度99.6％，HPLC)，其中牛磺鹅去氧胆酸的含量为0.3％，其他单杂含量0.05％(液相色谱测定)

含量检测^[3]

一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法，所述有关物质为牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸，其特征在于包括以下步骤：

A、取牛磺熊去氧胆酸-sigma对照品为已知对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.5mg/ml的对照品溶液，取牛磺熊去氧胆酸样品用稀释剂溶解为浓度为0.5ml/ml的对照品供试品溶液；

B、分别取20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图中牛磺熊去氧胆酸的峰面积，按照外标法，以无水牛磺熊去氧胆酸来计算HPLC含量，不小于99％；

C、取中检所对照品牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸，再用流动相溶解成浓度为5ug/ml的杂质对照品溶液，取牛磺熊去氧胆酸样品用稀释剂溶解为浓度为0.5mg/ml的样品溶液；

D、分别取20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图中牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸的峰面积，再按照外标法计算牛磺熊去氧胆酸样品中有关物质的大小，牛磺鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸不超过1.0％和0.5％。

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN201210162693.5牛磺熊去氧胆酸钠的制备方法

[2][中国发明,中国发明授权]CN201010552339.4一种高纯度牛磺熊去氧胆酸及其制备方法

[3][中国发明,中国发明授权]CN201610192203.4一种新的牛磺熊去氧胆酸含量以及有关物质的检测方法