柽柳素-3-O-葡萄糖苷的制备

背景及概述^[1]

印楝(Azadirachta indica)是一种著名的药用和杀虫植物。Yadav D K等人报告了可从印楝叶用甲醇提取得到柽柳素-3-O-葡萄糖苷，柽柳素-3-O-葡萄糖苷在动物模型中具有胃保护活性。

柽柳素-3-O-葡萄糖苷以剂量依赖性方式显示了对吲哚美辛诱导的小鼠胃溃疡的显著保护作用。此外，离体和环状二向色性研究证实柽柳素-3-O-葡萄糖苷抑制酶基质金属蛋白酶9（MMP-9）活性，IC50值为50μmol。分子对接和动力学表明柽柳素-3-O-葡萄糖苷结合到MMP-9活性位点的口袋中，与催化锌形成配位络合物，从而导致抑制MMP-9活性。

制备^[1]

将印楝的叶子切成小块，并在室温（24-27°C）下风干。将干燥的叶子（2千克）用石油醚脱脂24小时，并在环境温度下每次用甲醇（10×3 L）提取3次，每次48小时。过滤甲醇提取物，并将溶剂在真空下于40-45°C干燥，得到440 g粗提取物（收率22％）。将甲醇提取物在nBuOH和水饱和的n-BuOH之间分配。用水进一步洗涤有机层以完全除去无机杂质，游离糖和其他水溶性残余物，然后使用旋转蒸发仪在减压下蒸发至干，得到深褐色残余物。萃取物在硅胶柱上色谱分离（60-120目）。依次用氯仿和各种CHCl3-MeOH混合物（19：1、9：1、8：2、7：3和1：1）进行梯度洗脱。总共收集106个洗脱液（每个400 mL），合并在TLC上具有相似斑点的洗脱液。用10％MeOH的CHCl3溶液洗脱，收集洗脱液（48-54），合并，然后在硅胶柱上进行色谱纯化凝胶（100-200目）。用CHCl3梯度洗脱，然后用CHCl3-MeOH的各种混合物（19：1、9：1、20：3和8：2）进行洗脱。总共收集75个洗脱液（100毫升），并通过TLC监测每个馏分。将用CHCl3-MeOH（19：1）洗脱的洗脱液（18-47）通过硅胶柱（100-200目）进行层析进一步纯化。然后将柱子依次用CHCl3和CHCl3-MeOH混合物（19：1、9：1）洗脱。TLC检查显示馏分8-25是相同的，合并并用MeOH结晶，得到柽柳素-3-O-葡萄糖苷（58 mg）。

参考文献

[1]Yadav D K , Bharitkar Y P , Hazra A , et al. Tamarixetin 3- O -β- d -Glucopyranoside from Azadirachta indica Leaves: Gastroprotective Role through Inhibition of Matrix Metalloproteinase-9 Activity in Mice[J]. Journal of Natural Products, 2017, 80(5).