背景[1-3]
糖原PAS染色液在组织学上，主要用来检测组织中的糖原或其他多糖物质。高碘酸是一种氧化剂，能将多糖分子中相邻的二醇基氧化成二醛基，醛基能与希夫试剂（Schiff reagent）反应生成红色不溶性复合物。糖原PAS染色液(细胞专用)利用真菌含有多糖，过碘酸氧化真菌壁上的多糖而暴露出醛基，醛基与无色Schiff结合呈现红色。该染色法性能稳定，特异性强；操作简捷，仅需0.5h；浓度低过碘酸更适用于对真菌染色，无盐酸乙醇分化液分化步骤。
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该技术不仅能显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。
过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化，这是很关键的步骤。
应用[4][5]
用于减少水牛XY精子分离过程中损伤的相关研究
精子的线粒体活性、质膜完整性和凋亡间均具有相关性。利用激光光镊拉曼光谱分析水牛精子分离、冷冻过程中蛋白质、碳水化合物和脂类等大分子物质结构和含量的变化,探讨水牛分离精子的损伤机理,以便进一步优化分离、冷冻精子程序。
研究结果发现：
(1)随着水牛精子分离、冷冻程序的进行,对精子头部的拉曼光谱分析可知,精子细胞内的葡萄糖(926cm-1)和蛋白质(1129、1612、1633cm-1)含量明显提高,而脂类(1301、1661cm-1)含量明显降低；精子中段部的拉曼光谱分析可知,脂类(1299、1445、1654cm-1)含量明显降低,而糖原(936cm-1)和蛋白质(1125cm-1)含量明显提高,这可能与精子细胞器的损伤有关。且四个阶段精子细胞的拉曼指纹图谱相似,仅峰值不同,从图形上无法有效识别这四个阶段的精子细胞。经优化的PCA-DFA预测新鲜、染色后、分选后和冷冻-解冻后精子的灵敏度和特异性基本>90%。
(2)分别添加MLT、PCB和IGF-I在水牛精子分离、冷冻过程中的染色液、分离收集液和冷冻稀释液中,与对照组相比,均能在不影响质膜完整性和细胞凋亡的同时,显著提高冷冻-解冻后分离精子的线粒体活性(p<0.05)。
(3)分别添加MLT、PCB和IGF-I在水牛精子分离、冷冻过程中的染色液、分离收集液和冷冻稀释液中,检测染色后、分选后和冷冻-解冻后精子的拉曼光谱。结果表明,在冷冻稀释液分别添加MLT、PCB和IGF-I,冷冻-解冻后的分离精子的拉曼光谱除归属糖原(头部490cm-1；中段部936cm-1)和脂类(头部1300、1661cm-1；中段部1300、1445、1655cm-1)特征峰外,其它特征峰强度明显减弱；而在染色液、分离收集液分别添加NLT、PCB和IGF-I对染色后和分选后精子的拉曼光谱的特征峰变化不明显。
另外,在水牛精子分离、冷冻过程各稀释液中添加抗氧化剂组与对照组的精子细胞的拉曼指纹图谱相似,仅峰值不同,从图形上无法有效识别这两组精子细胞。经优化的PCA-DFA预测添加抗氧化剂组精子的灵敏度和特异性均>90%。
参考文献
[1]The PCA and LDA analysis on the differential expression of proteins in breast cancer[J].Seng Liang,Manjit Singh,Saravanan Dharmaraj,Lay-Harn Gam.Disease Markers.2010(5)
[2]Use of Fluorescence Microscopy to Study Intracellular Signaling in Bacteria[J].David Kentner,Victor Sourjik.Annual Review of Microbiology.2010
[3]Quality assessment of bovine cryopreserved sperm after sexing by flow cytometry and their use in in vitro embryo production[J].Theriogenology.2010(9)
[4]Effect of semen preparation on casa motility results in cryopreserved bull spermatozoa[J].Alberto Contri,Claudio Valorz,Massimo Faustini,Laura Wegher,Augusto Carluccio.Theriogenology.2010(3)
[5]李晓霞.减少水牛XY精子分离过程中损伤的相关研究[D].广西大学,2011.
