(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽的测定方法

背景及概述^[1][2]

(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽在人体分布广泛，有着极其重要的生理功能。其不仅在对脑细胞具有独特的作用，能够激活处于沉睡状态的脑细胞，对因脑损伤导致的后遗症有很好的恢复作用;在免疫功能方面起着重要的作用，包括增加免疫系统、T 淋巴细胞、NK 细胞、巨噬细胞等的活性、抗病毒、增加γ-干扰素释放等；可以活化的免疫细胞促使内分泌细胞分泌的方式参与免疫调节，进而对 DNA 的基因调控和表达功能产生影响。

测定方法^[2]

夏宇沁等人建立了一种新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法测定(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽药物。方法将(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽与0.012mol/L高碘酸钠、0.01mol/L儿茶酚、0.3mol/L硼酸按体积比2∶2∶1∶1混合,于120℃反应10min后,用反相柱分离,以0.25mol/L硼酸盐缓冲液(pH 7.6)和甲醇为流动相,采用梯度洗脱,荧光检测器检测。同时与高效液相色谱紫外法、邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)柱前衍生荧光检测高效液相色谱法比较,测定体外及血样中L-EK的含量。

结果氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法检测含(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽血样,线性范围0.5～50.0mg/L,线性良好(r=0.999 8),血浆中检测限为0.1mg/L,且较另外两种方法不受内源性物质的干扰。结论新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法专属性好,灵敏度高,尤其适合生物样品中(D-ALA2)-亮氨酸脑啡肽药物的测定。

主要参考资料

[1] 方娉婷. Fmoc固相法合成亮氨酸脑啡肽[C]. 河南省化学会.河南省化学会2010年学术年会论文摘要集.河南省化学会:河南省化学学会,2010:362.

[2] 夏宇沁,陆烨,刘家池,梁建英.一种测定亮氨酸脑啡肽(L-EK)药物的新型荧光衍生化方法[J].复旦学报(医学版),2012,39(03):301-304.