丽春红染色液的使用和配置

背景及概述^[1]

丽春红（PonceauS）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulosemembrane）和醋酸纤维素膜（celluloseacetatemembrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。

使用^[1]

丽春红染色液，用于WB转膜效率检测，它与下游WB检测完全兼容，无任何干扰。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或者其他溶液洗去。可用于PVDF膜、硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜上蛋白的检测，不适用于尼龙膜上的蛋白检测。将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。

配制^[1]

常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylicacid）配制。配制方法如下：

一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。4℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。

二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2%（w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水杨酸。

主要参考资料

[1]丽春红染色液说明书