乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)的染色原理和操作

背景及概述^[1]

胆碱酯酶(cholinesterase)属于特异性酯酶，可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AChE)又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的调节作用；另一类为胆碱酯酶，又称假性胆碱酯酶(Pseudocholinesterase，PsChE)，能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。

乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内，生理功能尚不明确。显示乙酰胆碱酯酶的方法有Koell法、Snell和Garrett法、Karnovsky和Roots法等。乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱，磷酸盐与铅离子形成磷酸铅沉淀，再被S2+置换，形成硫化铅沉淀。其优点是操作简便、酯酶的扩散较少，其缺点是对底物对组织的渗透性较差，有可能出现假阳性。

产品组成^[1]

操作步骤^[1]

1、冰冻切片，厚6μm，不固定或置于遇冷的10%甲醛钙固定。

2、蒸馏水洗。

3、配制AChE孵育液：临用前，取A2加入至A1中，使后者完全溶解，即为A12混合液，4℃保存。取适量的A12混合液、A3、A4、A5、A6，按A12混合液：A3：A4：A5：A6充分混合，即为AChE孵育液，6h内使用。注意：如果想显示AChE和ChE，即无需区分AChE和ChE，无需加入Iso-OMPA。

4、切片入预温的乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)孵育液中，避光孵育(一般不超过6h)，至切片呈淡棕色时取出。

5、蒸馏水洗，镜下观察如活性部位仍较淡，可于蒸馏水洗后再进行孵育，至反应合适为止。

6、流水冲洗5min。

7、滴加Leagene苏木素染色液浅染细胞核。

8、流水冲洗。

9、常规脱水、透明，中性树胶封固。

注意事项^[1]

乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。

主要参考资料

[1]乙酰胆碱酯酶染色液(亚铁氰化铜法)操作说明