酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)的应用和操作步骤
发布日期:2020/4/26 9:57:46
背景及概述[1-2]
酸性磷酸酶一种存在于红细胞、溶酶体及前列腺组织的酶。尤在前列腺中活性大大高出其他组织,故被认为是前列腺组织的特征性酶。临床酸性磷酸酶测定,Bodanaky法正常值为0~1.1U。患前列腺癌时,血清中此酶含量增加,特别在骨转移时增加明显。在患前列腺增生症、乳癌和胃癌等疾病时,该酶也可有一定程度增加,要注意区别。临床主要用于前列腺癌骨转移的判断试验。
酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)以β-甘油磷酸钠为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐,遇到铅离子则生成磷酸铅沉淀,再被S2+置换,最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲,Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂,Mn2+为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可,但多用冰冻切片。临床上,酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应,霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应,Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。
操作步骤[1]
1、冰冻切片至蒸馏水。
2、切片入酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)孵育液,置于37℃温箱,浸染15-60min。
3、入37℃蒸馏水中洗2次,每次1min,以去除未被吸附的铅。
4、在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育1-2min。
5、流水冲洗3-5min,蒸馏水洗。
6、核固红复染细胞核,蒸馏水洗。甘油明胶封片。
主要参考资料
[1] 临床医学多用辞典
[2] 酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)操作说明
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