酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)的应用和操作步骤

背景及概述^[1-2]

酸性磷酸酶一种存在于红细胞、溶酶体及前列腺组织的酶。尤在前列腺中活性大大高出其他组织，故被认为是前列腺组织的特征性酶。临床酸性磷酸酶测定，Bodanaky法正常值为0～1.1U。患前列腺癌时，血清中此酶含量增加，特别在骨转移时增加明显。在患前列腺增生症、乳癌和胃癌等疾病时，该酶也可有一定程度增加，要注意区别。临床主要用于前列腺癌骨转移的判断试验。

酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐，遇到铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被S2+置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn2+为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰冻切片。临床上，酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应，霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应，Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。

操作步骤^[1]

1、冰冻切片至蒸馏水。

2、切片入酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)孵育液，置于37℃温箱，浸染15-60min。

3、入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。

4、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。

5、流水冲洗3-5min，蒸馏水洗。

6、核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。

主要参考资料

[1] 临床医学多用辞典

[2] 酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)操作说明