螺旋体染色液(LEVADITI硝酸银法)的产品组成和操作步骤

背景及概述^[1]

螺旋体(spirochaeta)是一类细长、弯曲呈螺旋状、运动活波的原核细胞型微生物，具有细菌的基本结构，细胞壁有脂多糖和壁酸。螺旋体分为密螺旋体(如梅毒螺旋体)、疏螺旋体(如回归热螺旋体)、钩端螺旋体等。梅毒螺旋体有8～12均匀的螺旋，两端尖直；钩端螺旋体细长，数目较多而且细密，一端或两端弯曲呈钩状，菌体亦常屈曲呈C形或S形。梅毒螺旋体和钩端螺旋体可用镀银法进行显色，如Levaditi法、Warthin-Starry法。螺旋体染色液(Levaditi硝酸银法)是利用螺旋体具有的嗜银性，在一定条件下螺旋体可从银液中吸附银离子，经还原液处理后，螺旋体内吸附的银离子被还原为黑色的金属银而显色。该染色液主要用于显示梅毒螺旋体，亦可显示钩端螺旋体，但较少显示热回归螺旋体，对肝脏梅毒树胶肿和肝脏钩端螺旋体具有鉴别作用。

产品组成^[1]

操作步骤^[1]

1、组织切片厚度1～2mm为佳，置于10%福尔马林中固定2～4天。

2、流水冲洗过夜。

3、95%乙醇浸泡24h。

4、蒸馏水浸洗并不停摇动，直至组织下沉为止。

5、更换新的蒸馏水浸洗10min。

6、入硝酸银溶液，加盖置于37℃恒温箱孵育1天，更换新的硝酸银溶液，继续37℃恒温箱孵育2天。

7、蒸馏水浸洗3次，每次10min。

8、入配制好的Levaditi还原液，加盖室温避光孵育2天。

9、蒸馏水浸洗3次，每次2min。

10、常规脱水透明，浸蜡包埋。

11、切片厚度6～8μm，贴片，烤干。

12、二甲苯脱蜡2次，中性树胶封固。

染色结果^[1]

梅毒螺旋体、钩端螺旋体

黑色或棕黑色

注意事项^[1]

1、实验所用器皿需用硫酸洗液浸泡，洗干净。

2、步骤4、5的洗片步骤很有必要，一定要把组织中的甲醛和乙醇彻底清除，否则易导致组织内银盐的沉淀

3、某些细菌和真菌菌丝也会被该染液染成黑色，应注意螺线体为螺旋状形态，并加以鉴别。

主要参考资料

[1]螺旋体染色液(LEVADITI硝酸银法)操作说明