DNA/RNA蛋白质共提取试剂盒的应用

概述^[1]

DNA/RNA蛋白质共提取试剂盒是从培养细胞和动物软组织样品中同时提取DNA, RNA和蛋白质最为快速和简单的方法。试剂盒采用硅胶柱纯化技术，抽提过程中无需用到危险的酚氯仿抽提，也无需用到耗时的醇类沉淀。试剂盒适合于从<1x 10^7真核培养细胞中同时抽提RNA，DNA和蛋白质，也适合于处理小于20mg动物软组织如肝脏，肾脏，脾脏，脑等样品提取RNA，DNA和蛋白质。纯化的RNA可直接用于RT-PCR, Northern blot, poly-A+ 纯化，核酸保护和体外翻译等实验。得到的DNA可直接用于PCR，Southern杂交等。得到的Protein可直接用于SDS-PAGE电泳，Western杂交等。

试剂盒组成^[1]

产品特点^[1]

1. 可同时提取出样品的基因组DNA、总RNA和蛋白质，时间不到1 h。

2. 提取的基因组DNA质量高，分子量≥20kb。

3. 提取的总RNA质量高，无基因组DNA污染。

4. 分离出的蛋白适用于SDS-PAGE和Western Blot分析。

5. 得率高，重复性好。

6. 无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀

应用^[1]

从动物组织中可纯化出最高 10 µg 的基因组 DNA。纯化的基因组 DNA 平均长度为 20-30 kb。这个长度的 DNA 特别适 用于 PCR，完全变性的模板对于高扩增效率非常重要。纯化的 DNA 可直接用于任何后续实验，包括： PCR 和 real-time PCR ；Southern, dot 和 slot blot 分析 ；比较基因组杂交（CGH） ；基因型分型，SNP 分析 从动物组织中可纯化出最高 20 µg 的总 RNA。纯化的 RNA 可直接用于任何后续实验，包括： RT-PCR ；实时荧光定量 PCR ；差异显示； cDNA 合成； Southern, dot 和 slot blot 分析；引物延伸 ；Poly A + RNA 筛选 ；RNase/S1 核酸酶保护 ；微阵列 提取的蛋白为变性形式。纯化的蛋白可用于后续实验，比如：l D 凝胶电泳； Western blotting。

试剂准备^[1]

每次使用前检查 Buffer Lysis-DRP 是否出现沉淀。如出现沉淀，将溶液于 56°C 温浴使沉淀溶解，降至室温后再使用。CE Buffer 含 10 mM Tris-HCl，0.5 mM EDTA，pH 9.0。后续实验如果要避免使用 EDTA，最后一步可用水洗脱 DNA。但是，pH 小于 7.0 的水不推荐使用。

提供的 CW1 Solution，CW2 Solution，GT Solution 和 NT Solution 为浓缩液。次使用时，13 ml CW1 Solution 中应加入 17 ml 乙醇，9 ml CW2 Solution 中应加入 21 ml 乙醇，18 ml GT Solution 中应加入 12 ml 乙醇，6 ml NT Solution 中应加入 24 ml 乙醇，以配制成工作液。

注意：产品仅用于基础科学研究，不能用于人类或动物！

通用指南^[1]

All-In-One DNA/RNA/Protein Mini-Preps Kit 采用了一种新技术， EZ-10 DNA Column 可选择性结合双链 DNA，RZ-10RNA Column 可结合总 RNA，并用一种新的蛋白沉淀化学技术纯化蛋白质。

生物样品首先在一种高度变性胍类缓冲液中被裂解和匀浆(buffer lysis-DRP), 这种缓冲液可直接使 DNases 和 RNases及蛋白酶失活。确保了提取的 DNA 和 RNA 的完整性。

DNA 在整个匀浆液中中选择性地吸附到 EZ-10 DNA Column。用 buffer lysis-DRP 洗涤吸附膜可去除 EZ-10 DNA spincolum 上的 RNA/蛋白质污染。PCR 抑制剂，蛋白质和盐离子可被 CW1 Solution 和 CW2 Solution 完全去除。纯化的 DNA在 CE buffer 中被洗脱。

将乙醇加入到 EZ-10 DNA spin column 收集管的液体中，为 RNA 的吸附提供了适当的条件。将样品加入到 RZ-10 spin column 后，总 RNA 即被吸附到膜上。PCR 抑制剂，蛋白质和盐离子可被 GT Solution 和 NT Solution 完全去除。纯化的 RNA在 RNase-Free 水中被洗脱。

PP Solution 缓冲液，是一种新型的蛋白质沉淀液。加入到 RZ-10 spin column 收集管中的液体后，通过离心可将蛋白沉淀出来。完整的总蛋白重新溶解于 PD Solution，可直接用于后续实验中。

样品准备注意事项^[1]

1.样品采集和保存

使用新鲜样品可获得结果。从新鲜样品中纯化总 DNA/RNA 时，样品采集后立即将将新鲜的细胞和组织样品放入液氮或置于冰上。迅速将样品裂解或匀浆。

如果样品使用前要先保存，应立即放入于液氮冷冻或放入 RNALater(产品编号：B644171)，然后于-80ºC 长期保存。保存的样品应避免反复冻融，因为这样会导致 DNA/RNA 的降解。

2.样品匀浆

我们推荐用液氮处理组织样品，并立即用 Buffer Lysis-DR/Buffer Lysis-DRP 裂解样品。但是，使用匀浆机也会取得较好结果。样品采集和匀浆使操作应迅速，拿样品和试剂时应戴一次性手套，避免 RNase 污染。使用研钵、杵和铲子处理和转移样品时应预冷。加入 Buffer Lysis-DR/Buffer Lysis-DRP 前不要让组织样品解冻。

3.样品用量

DNA/RNA 的得率和质量取决于样品量。不可超过裂解液裂解能力和吸附膜的吸附能力。根据下表使用适量的原始材料：

主要参考资料

[1]All-In-One DNA/RNA/蛋白提取试剂盒产品说明书