白僵菌的制备方法

概述^[1]

白僵菌是一种子囊菌类的虫生真菌，主要种类包括球孢白僵菌和布氏白僵菌等，常通过无性繁殖生成分生孢子，菌丝有横隔有分枝。白僵菌可以侵入6个目15科200多种昆虫、螨类的虫体内大量繁殖，同时产生白僵素(非核糖体多肽类毒素)、卵孢霉素(苯醌类毒素)和草酸钙结晶，这些物质可引起昆虫中毒，打乱新陈代谢以致死亡。其中，球孢白僵菌为子囊菌类的真菌，可工业化培养生产，人们利用其产生的分子孢子可加工成微生物杀虫剂。

在害虫病原微生物中，因真菌致病的最多（细菌，病毒），居60%以上，而在昆虫的真菌病中，由白僵菌引起的占20%以上。可见，白僵菌是昆虫重要的病原菌之一。白僵菌在世界分布极广，欧、亚、非、澳、南北美洲都有，就国家来说有20-30个。白僵菌的寄主范围很广，主要寄生于鳞翅目、同翅目、膜翅目、直翅目等的200多种昆虫和螨类，而且致病力强，可用于防治松毛虫、玉米螟、大豆食心虫、高粱条螟、甘薯象鼻虫、马铃薯甲虫、茶叶毒蛾、松针毒蛾、稻苞虫、稻叶蝉、稻飞虱等害虫，具有使用方便、对人畜安全、不污染环境、不杀害天敌、经济有效等优点，已成为我国防治森林害虫的主要微生物杀虫剂之一。

制备方法^[2]

一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法，其应用了一种杀虫白僵菌菌粉的培养基，该培养基包括斜面培养基、二级液体扩大培养基、三级固体扩大培养基；所述斜面培养基的组成成分以重量百分数计分别为：马铃薯20%、白砂糖1%、琼脂1%、水78%；所述二级液体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为：黄豆粉1%、玉米粉1%、白砂糖1%、尿素0.02%、蛋白胨0.02%、磷酸二氢钾0.02%，水96.94%；所述三级固体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为：麦麸60%、谷壳40%；所述黄豆粉、玉米粉的粒度为300-500目；所述马铃薯的制备方法为先将马铃薯去皮，再切片煮30min，过滤得到；

具体包括以下步骤：

步骤1、斜面菌种培养：取马铃薯、白砂糖、琼脂、水按比例混合制得斜面培养基，将以白僵虫为标本，不断的分离提纯而获得的原菌种放入斜面培养基接种，接种后的斜面培养基放入22℃恒温箱内培养，第1-2天着重检查有无细菌生长，如见斜面上有粘稠具光泽的薄膜出现即为细菌污染，应去掉，继续观察有无细菌生长，如有则重复上述操作至第15天，如无其他杂菌，则批斜面菌种制备完成；所述制备斜面菌种的批数是根据生产量而定的，每批的生产量在10吨以上；

步骤2、二级液体扩大培养：取黄豆粉、玉米粉、白砂糖、尿素、蛋白胨、磷酸二氢钾、水按比例混合制得二级液体扩大培养基，将配好的二级液体培养基装入容量为1000L的三角瓶内，装量为三角瓶容量的1/3，塞好瓶塞，高压灭菌，在无菌条件下每瓶接种一支试管步骤1制得的斜面菌种，接2瓶，接种后的二级液体扩大培养基置于往复式摇床上震荡10h，温度控制在22℃，频率80次/min，用电子显微镜检测孢子发芽率在85%以上即可做为二级液体菌种；

步骤3、三级固体扩大培养：取麦麸、谷壳按比例进行混合均匀制得三级固体扩大培养基，将5kg三级固体扩大培养基装入布袋或纤维袋，扎紧袋口置于灭菌锅炉中消毒，灭菌后的三级固体扩大培养基按20%的接种量加入步骤2制得的二级液体菌种，培养室及用具彻底消毒后，将接种后的三级固体扩大培养基平铺在簸箕内，厚度为0.6寸，进行浅盘发酵制得白僵菌；所述培养室及用具彻底消毒的步骤为：将用具在接种前洗净晾干放入培养室，然后将培养室用硫磺或40%的甲醛熏蒸；所述浅盘发酵的具体步骤为：第1-5天内温度控制在22℃，当温度达到26℃时，打开窗门或用风扇进行降温至20℃，共计浅盘发酵15天；

步骤4、干燥、粉碎：将步骤3制得的白僵菌经烘干、粉碎由输送带输入储存罐中，再进行包装，贮存；所述烘干操作在烘干房中进行，烘干房采用煤炉、电炉、暖气片加温，烘干温度30℃，烘干时间3天；粉碎收集时，白僵菌粉的细度在40目筛以上，待储存罐收有的菌粉含孢量为100亿/g时，将菌粉分袋包装，此时菌粉的活孢子率在85%以上。

主要参考资料

[1] 刘银泉, 冯明光, & 刘树生. (1999). 球孢白僵菌对桃蚜的毒力测定. 植物保护学报, 26(4), 347-352.

[2] 孙继美, 丁珊, & 肖华. . 球孢白僵菌防治松褐天牛的研究. 中国森林病虫, 000(003), 16.

[3] 刘健, 陈洪章, & 李佐虎. (2003). 白僵菌杀虫剂生产工艺研究状况与展望. 中国生物防治学报, 19(2), 86-90.