3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体)的应用

背景^[1-3]

3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体)是可以特异性结合3-磷酸甘油醛脱氢酶的抗体蛋白。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解（glycolysis）过程中的关键酶。除了在胞质中作为糖酵解的酶以外，有证据表明哺乳动物细胞中的GAPDH参与了多种胞内生化过程，包括膜融合（membrane fusion）、微管成束（microtubule bundling）、磷酸转移酶（phosphotransferase）激活、核内RNA出核、DNA复制与DNA修复。一些生理因素，诸如低氧（hypoxia）和尿糖（diabetes），可以增加GAPDH在特定细胞中的表达。GAPDH存在于几乎所有的组织中，以高水平持续表达。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30－40kDa的亚基组成。xy-13254R GAAα葡萄糖苷酶/溶酶体α-葡糖苷酶抗体GAPDH蛋白几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参,是很好的内参抗体。GAPDH作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。在实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确；或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差需要通过测定每个样品中实际转到膜上的GAPDH的含量来进行校正，所以一般的western实验都需要进行内参设置。具体校正的方法就是将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量。然后才进行样品与样品之间的比较。

应用^[4][5]

用于GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发

甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是生物体内一类十分保守的重要多功能酶类，广泛存在于原核及真核生物体内，如大肠杆菌、酵母、秀丽线虫、大鼠和小鼠等模式生物，主要参与生物体内糖代谢中糖酵解的第六步反应，即催化甘油醛-3-磷酸转化为1,3-二磷酸甘油酸并释放出能量(ATP)的过程。生物界中GAPDH单体分子量大小在30kD-40kD之间，天然状态的GAPDH主要以四聚体形式存在，其氨基酸编码序列在原核及真核生物体内均高度保守，同源性高达76%。原核及真核生物体内GAPDH蛋白是一类功能上十分保守的重要蛋白酶超家族，在不同的物种中分别由不同的基因编码，如微生物的gapA,gapB和gapC基因、酵母菌的TDH-1,TDH-2和TDH-3基因、秀丽线虫的gpd-1,gpd-2,gpd-3和gpd-4基因、大鼠的G3PDH基因等。不同物种中多种编码基因的存在一方面提示了不同GAPDH变体之间的功能代偿性，另一方面反映了个体应对环境压力的高度可调控性，为其作为管家蛋白的功能保守性提供了重要依据。

内标蛋白是生物体内一类重要的管家蛋白，具有序列保守性高、组织分布广等特点。目如常见的内标蛋白主要包括：细胞骨架蛋白肌动蛋白actin、微管蛋白Tubulin、细胞代谢相关蛋白GAPDH等。其中，GAPDH在同种细胞或组织中的蛋白表达量相对恒定，且很少受外部应激因素的影响，已被广泛用作RT-PCR和Western blot等分子生物学实验标准化的内参分子，特别是其作为内标蛋白在组织或细胞内蛋白相对表达定量中的应用。虽然GAPDH作为内标蛋白的特性得到了广泛应用，但是以往仅集中于作为真核生物体内蛋白表达相对定量的研究。

参考文献

[1]The neurodegeneration in Alzheimer disease and the prion protein[J].Gianluigi Forloni,Alessandra Sclip,Tiziana Borsello,Claudia Balducci.Prion.2013(1)

[2]A systematic study on lyophilization process of polymersomes for long-term storage using doxorubicin-loaded(PEG)3–PLA nanopolymersomes[J].Wubeante Yenet Ayen,Neeraj Kumar.European Journal of Pharmaceutical Sciences.2012(5)

[3]β-Actin as a loading control for plasma-based Western blot analysis of major depressive disorder patients[J].Rufang Zhang,Deyu Yang,Chanjuan Zhou,Ke Cheng,Zhao Liu,Liang Chen,Liang Fang,Peng Xie.Analytical Biochemistry.2012(2)

[4]Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase:A universal internal control for Western blots in prokaryotic and eukaryotic cells[J].Yonghong Wu,Min Wu,Guowei He,Xiao Zhang,Weiguang Li,Yan Gao,Zhihui Li,Zhaoyan Wang,Chenggang Zhang.Analytical Biochemistry.2012(1)

[5]吴永红.GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发[D].中国人民解放军军事医学科学院,2013.