8-羟基脱氧鸟苷抗体的应用

背景^[1-3]

8-羟基脱氧鸟苷抗体是可以特异性结合8-羟基脱氧鸟苷的免疫蛋白，其是将8-羟基脱氧鸟苷注射到无菌动物体内进行系统免疫后在其血清中纯化制得的高纯度免疫蛋白。

羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy一2 deoxyguanosine，8-OHDG)是活性氧自由基如羟自由基、单线态氧等攻击DNA分子中的鸟嘌呤碱基第8位碳原子而产生的一种氧化性加合物。衰老的自由基学说认为，衰老是由自由基引起组织损害的结果。辐射和内源性与外源性化合物产生的活性氧基与突变、癌症及衰老等有关。自由基对生物体具有多种损害作用，其作用机制主要涉及DNA的损伤。机体的氧化损伤广泛存在，主要表现为生物大分子(如DNA、蛋白质、脂类等)结构和功能的损伤，并由此导致基因突变、细胞癌变及个体衰老等现象。8-OHDG可以通过高灵敏度、高选择性的检测手段来检测，已成为DNA氧化损伤中最常用的生物标志物(Biomarker)。8-OHDG作为内源性及外源性因素对DNA氧化损伤作用的生物标志物，是一个极有前途的指标，通过8-OHDG的检测可以评估体内氧化损伤和修复的程度，氧化应激与DNA损伤的相互关系，对研究退行性疾病、衰老机制、癌发生机制、环境毒物与氧化应激的关系等均有重要的意义，也可以用来评价抗氧化剂治疗DNA氧化损伤的效果。已经证实，饮食、超氧化物歧化酶、Melatonin等对8-OHDG水平具有调节作用。近期日本学者制成一种抗氧化作用鸡尾酒，由葵花籽、绿茶和维生素c组成，证实了对FeC12诱导的8-OHDG异常增加有回调作用。

应用^[4][5]

用于8-羟基脱氧鸟苷ELISA实验方法的建立及其在妊娠糖尿病研究中的初步应用研究

8羟基-2-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2deoxyguanosine,8-OHdG)是活性氧自由基如羟自由基、单线态氧等攻击DNA分子中的鸟嘌呤碱基第8位碳原子而产生的一种氧化性加合物,若不被及时清除可引起DNA复制过程中G-C/A-T型碱基配对错误从而引起基因点突变甚至癌变。研究表明糖尿病、癌症、以及心血管疾病的发病和疾病发展都与氧化损伤有着密切的关系,也都可以检测到机体8-OHdG含量的升高,因此测定机体8-OHdG水平不仅可以评估机体受到的氧化损伤程度,还可以辅助相关疾病的诊断或反映相关疾病的进程。获得8-OHdG特异性配对抗体,建立生物素-亲和素双抗夹心ELISA检测8-OHdG的方法,并在此基础上检测妊糖患者和健康孕妇的8-OHdG含量,对比研究妊娠糖尿病与8-OHdG水平的关系。

研究方法:本研究通过偶联形成8-OHdG-mcKLH复合物作为免疫原,免疫注射Balb/C小鼠,并进行细胞融合得到单克隆抗体。通过ELISA法筛选获得阳性杂交瘤细胞株,再对细胞株进行扩大化生产,并对得到的腹水抗体进行纯化,筛选得到8-OHdG的高特异性配对抗体。通过测定抗体纯度、交叉反应性、效价等方法判断该单克隆抗体的特异性和灵敏性。以配对抗体为基础,通过筛选包被液、封闭液、包被抗体与酶标抗体的浓度等条件,建立生物素-亲和素标记的双抗夹心ELISA定量检测8-OHdG的方法,并通过批内批间实验、回收率等方法来评价该检测方法的稳定性及准确性。

参考文献

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[4] The International Federation of Gynecology and Obstetrics(FIGO)Initiative on gestational diabetes mellitus:A pragmatic guide for diagnosis,management,and care#[J].Moshe Hod,Anil Kapur,David A.Sacks,Eran Hadar,Mukesh Agarwal,Gian Carlo Di Renzo,Luis Cabero Roura,Harold David McIntyre,Jessica L.Morris,Hema Divakar.International Journal of Gynecology and Obstetric.2015

[5] 邱月.8-羟基脱氧鸟苷ELISA实验方法的建立及其在妊娠糖尿病研究中的初步应用[D].北京协和医学院,2018.