Ac-DEVD-pNA的制备

概述^[1]

Caspase全称为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶。Caspase与真核细胞凋亡密切相关，并参与细胞的生长、分化与凋亡调节。Caspase是一类蛋白酶家族，成员较多，在人类，已经鉴定了11种不同的caspase，根据其蛋白酶序列的同源性可分为3个亚族：Caspase-1亚族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亚族包括Caspase-2、9； Caspase-3亚族包括Caspase-3、6、7、8、10。作为caspase-3/7的首选肽类底物，Ac-DEVD-pNA和Ac-DEVD-AMC被广泛应用于细胞生物学、化学生物学和药用化学领域中。目前，Ac-DEVD-pNA主要用于检测细胞中caspase-3和caspase-7的活性，也用于鉴定和评估caspase-3和caspase-7抑制剂和procaspase-3/7的小分子激活剂。其具体作用机理是：Caspase-3或caspase-7催化Ac-DEVD-pNA的水解，继而释放出发色基团对硝基苯胺，通过对对硝基苯胺发色强度的检测，相应检测出体内caspase-3或caspase-7的活性大小。

制备^[1]

Ac-DEVD-pNA制备如下：

1）合成Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA

取Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA(1.44g，1.8mmol)，DCM40ml加入到圆底烧瓶中，搅拌反应，乙酸、三乙胺再缓缓滴加到到反应液中，反应液立即变为琼脂状，用玻璃棒搅拌，再加入二氯甲院，避光反应，完全反应。真空浓缩再用乙醚碾磨，真空过滤，干燥得到白色固体粉末1.32g，产率91%。

反应方程式：

2）合成目标产物Ac-DEVD-pNA

取1.32gAc-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA加入到三氟乙酸/二氯甲烷溶液中，反应液慢慢澄清，室温下避光撹拌反应，真空浓缩，残留液用乙醚碾磨三次，然后真空过滤，干燥得到白色稍带浅棕色粉末固体0.96g，产率为91.4%。反应方程式：

主要参考资料

[1] Caspase-3/7底物的合成及其相关荧光分子合成新方法的研究