酚红指示剂的应用

概述^[1]

酚红是一种深红色结晶性粉末，微溶于水。酚红指示剂主要用作酸碱指标剂。其是由酚红(Phenolsulfonphthalein)所配制成的0.02~0.05%的醇溶液。当被测溶液的pH值小于6.8，则指示剂呈现黄色的酸性反应；若被测溶液的pH值大于8.4，则指示剂呈现红色的碱性反应。

应用^[2]

尿素酶活性快速测定

0.1N氢氧化钠：称0.4g氢氧化钠溶于100ml水中。

0.1N硫酸：将2.77ml浓硫酸加入1000ml水中稀释。

尿素—酚红指示剂溶液配制：

0.14g酚红指示剂溶于35ml水中+7ml 0.1N氢氧化钠

混合 0.1N硫酸滴定  琥珀色21g尿素溶于300ml水中

实验方法：

将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿(培养皿)中，将已调好的尿素——酚红指示剂溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全浸湿，停留5min，观察豆粕的红色反应。

注意事项：

尿素-酚红指示剂溶液保质期90天，过期重新配制。

尿素分解试验

培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。

主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。

奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。

快速测定农业设施中CO₂浓度

实现本方法的原理：根据NaHCO3与酚红指示剂混合溶液在不同浓度CO2条件下 会呈现不同的颜色，用颜色的深浅来判断CO2浓度高低。

NaHCO3水溶液： 呈微碱性(pH＝10.66)，加入酚红指示剂呈无色。

当CO2与NaHCO3水溶液反应后，使溶液由弱碱性向弱酸性变化，而酚红指示剂的指示范围为：6.8～8.4(黄～红)。

本CO2浓度的快速测定方法，具有快速、方便、成本低、技术容易掌握等特点， 非常适合于我国农村实际情况，便于农民在田间使用，因此比较容易得到推广应用， 而常规的CO2浓度检测方法成本高、操作复杂，运行费用高，不适于田间使用。

快速定性检测幽门螺杆菌感染

取尿素(hydrogen eroxide urea)50g，加入无离子水5000ml混匀配成浓度为1％ 的尿素溶液，加入适量酚红指示剂至溶液呈黄色。放入华特门试纸待之完全浸透，待试 纸完全浸透后，取出晾干，将试纸裁成圆片备用。

使用前1-5分钟，在放有华特门干试纸的反应板浅凹内加入1-2滴蒸馏水，使试纸 上的尿素及酚红溶于水中；取1％尿素酶溶液1-2滴加入设定的浅凹中，作阳性对照孔； 取胃镜检测时取出的胃粘膜标本放入检测浅凹中；溶液变成粉红色，示为阳性；若胃粘 膜标本显示为阳性，即可定性为幽门螺杆菌感染。

阳性对照孔：可见溶液变成粉红色，显示为阳性。

检测孔：放入已证实的HP感染阳性病人的胃粘膜标本，也呈阳性的粉红色。

重复实验：结果表明准确率为98.4％。

上述实验中，华特门试纸(Whatman paper)和尿素(Urea)由Crown Scientific公 司提供，酚红PH指示剂、尿素酶购自SIGMA公司。

该方法优点：

1、原料来源丰富，价格低廉；

2、反应盒稳定，反应盒所用试纸可以长时间室温保存，保质期长；

3、制作及检测步骤简单，只需1人即可完成整个操作过程；

4、定性准确，实验证明，准确率为98.4％；

5、检测速度快，一次检测时间仅为1-10分钟，减少了人力资源的浪费。

血浆（清）HCO₃^-的含量

实验方法原理

血浆（清）中加人过量的标准盐酸溶液，使酸与HCO3-起中和反应，释放出CO2然后以标准的氢氧化钠滴定剩余的盐酸，以氢氧化钠的耗量计算出血浆HCO3-的含量，以血浆（清）原来的PH作为滴定的终点。

实验步骤：

一、实验试剂：

1. 0.01mol/L盐酸：取精确标定的1.00mol/L盐酸溶液1.0ml，移至100ml容量瓶中，用生理盐水稀释至刻度。

2. 0.01mol/L氢氧化钠：取精确标定的100mol/L氢氧化钠1.0ml移至100ml容量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，此液应密闭保存，约可用1周。

3. 酚红指示剂：称取酚红50mg，加0.01mol/L氢氧化钠14.1ml，研磨溶解后，加生理盐水至250ml。

4. 生理盐水

二、实验操作：取小试管2支，标明测定管及对照管，各管加入新鲜血浆（或血清）0.1ml，酚红指示剂2滴，对照管中加人生理盐水2.5ml，测定管中准确加入0.01mol/L盐酸0.5ml。振摇1分钟，使CO2逸出，然后用微量滴定管将0.01mol/L氢氧化钠逐滴加人，滴至淡粉红色颜色且保持15秒钟为终点。

三、计算：

血清（浆）HCO3-mmol/L=（0.5-滴定用0.01mol/L氢氧化钠ml数）×100

（即：剩余的毫升数×100为二氧化碳结合力的值）

参考值：HCO3-成人：20-29 mmol/L

儿童：18-27 mmol/L

主要参考资料

[1] 蒋增海, 徐耀辉, 邓同炜, & 韩文龙. . 酚红指示剂微量稀释法测定副猪嗜血杆菌的药物敏感性. 畜牧与兽医(4), 109-111,共3页.

[2] 张皓. (2007). 支原体培养和鉴定方法的探讨. 中国现代医生, 45(6), 65-65.