希夫试剂的制备方法

背景及概述^[1]

希夫试剂(Schiff)又称品红亚硫酸试剂。品红是一种红色染料，将二氧化硫通入品红水溶液中，品红的红色褪去，得到的无色溶液称为品红亚硫酸试剂。它能跟醛作用显紫色，与酮作用不显色。这一显色反应非常灵敏，可用于鉴别醛类化合物。使用这种方法时，溶液中不能存在碱性物质和氧化剂，也不能加热，否则会消耗亚硫酸，溶液恢复品红的红色，出现假阳性反应。在糖原、粘液的过碘酸希夫反应(PAS)和核酸的富尔根染色技术中，希夫试剂是染色成败的关键因素之一，另外，该试剂还可用来显示真菌、脂褐素等物质。长期以来希夫试剂的配制有加热配制和冷配法，前者较为经典但步骤繁琐，后者的优点在于配制相对简单、易学。

变色原理^[2]

从上面结构可以看出，希夫试剂中含有磺酸基，氨基，磺酸基易被氧化剂氧化，氨基在碱性条件下不稳定，因此，配制希夫试剂的时候，应该在冷溶液及酸性条件下进行配制；否则，SO2逸出，使试剂变成品红原来的颜色，干扰鉴别.

制备^[1]

配方1：把0.05g碱性品红溶于50mL蒸馏水中，过滤，在滤液中加入2mL饱和Na2SO3溶液，1h后，加入1mL浓HCl混合均匀。

配方2：把0.05g碱性品红溶于25mL水中，冷却后，加入0.5gNa2SO3固体和0.5mL浓HCl，再用水稀释到50mL，若呈浅黄色，可加入0.05g活性炭振荡，过滤，把滤液密封于棕色瓶里。

配方3：把0.05g碱性品红研细，溶于含0.5mL浓HCl的50mL水中，再加入0.5gNa2SO3固体，搅拌后，静置，直到红色褪去。

配方4：取0.1%的品红溶液50mL，加入未变质的Na2SO3固体，搅拌，直到红色褪去1h后，再加入浓HCl1mL，即可。

配方5：取0.1%的品红溶液25mL，另取25mL水并通入SO2气体使之饱和，将以上两个溶液混合均匀，静置。

配方6：将0.05g碱性品红溶于25mL新制的冷却饱和SO2溶液中，放置，直到溶液呈浅黄色或无色，再用蒸馏水稀释到50mL。

主要参考资料

[1]不同方法配制希夫试剂的染色效果

[2]希夫试剂配制方法的探讨