甜橙黄酮的主要应用

背景及概述^[1]

甜橙黄酮(sinensetin，3'，4'，5，6，7-pentamethoxyflavone)是多甲氧基黄酮的一种，广泛存在于柑橘属植物中的果实和果皮中，也存在于陈皮、枳实等中药材中。有报道，甜橙黄酮可通过与细胞色素P450CYP1酶作用产生代谢产物，抑制人MDA-MB-468乳腺癌细胞的增殖。可诱导MCF-7乳腺癌细胞内Ca2+浓度持续增加，还可活化Ca2+依赖的ucalpain和caspase-12，从而诱导细胞凋亡。

应用^[1-2]

甜橙黄酮广泛存在于柑橘属植物的果实、果皮以及陈皮、枳实等中药材中，其具有抗菌消炎、抗过敏、镇痛、防治心血管疾病和抗病毒、抗氧化等很好的保健作用。甜橙黄酮可通过与细胞色素P450CYP1酶作用产生代谢产物，抑制人体MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖；可诱导MCF-7乳腺癌细胞内Ca2+浓度持续增加，还可活化Ca2+依赖的u-calpain和caspase-12，从而诱导细胞凋亡；同时，甜橙黄酮还对人胃癌AGS细胞系有凋亡和抑制增殖的作用。

有研究探讨甜橙黄酮对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用及其机制。采用MTT法观察甜橙黄酮对AGS胃癌细胞生长的抑制作用；流式细胞仪检测甜橙黄酮对细胞周期的影响；AnnexinV-FITC/PI标记定量检测细胞凋亡率，DNA片段化分析进一步验证甜橙黄酮对细胞凋亡的作用；Hoechst33342染色后倒置荧光显微镜观察凋亡细胞形态；Westernblot检测对p21和p53蛋白表达的影响。结果：甜橙黄酮可明显抑制AGS胃癌细胞的增殖，呈时间和剂量依赖性；甜橙黄酮可阻滞细胞于G2/M期和增加AGS胃癌细胞凋亡率，并随剂量增大作用增强；60μmol.L-1甜橙黄酮作用48h产生凋亡特有的梯形条带；Hoechst33342染色观察到甜橙黄酮给药组出现细胞核浓缩、边缘化以及凋亡小体等细胞凋亡的形态特征；甜橙黄酮可呈剂量依赖地增强p21和p53蛋白表达。甜橙黄酮可显著抑制人AGS胃癌细胞的增殖，使细胞阻滞于G2/M期，并可诱导细胞凋亡，其机制可能与上调p21和p53蛋白有关。

有研究观察甜橙黄酮在斑马鱼及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上的抗血管新生能力。以150nmol/L内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)为阳性对照组、以相应浓度DMSO为空白对照组，观察不同浓度(3，10，30μmol/L)甜橙黄酮对转基因斑马鱼血管系统的影响，并通过实时荧光定量PCR检测相关血管新生基因表达的影响；分别采用XTT与流式细胞术检测3～100μmol/L甜橙黄酮对20ng/ml内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖和细胞周期的影响。结果：甜橙黄酮可以剂量依赖性地抑制斑马鱼节间血管(ISV)的形成，下调血管新生相关基因hras、kdrl和vegfaa的表达；可剂量依赖性抑制VEGF诱导的HUVECs增殖，并诱导HUVECs停滞于细胞周期G0/G1期。结论：甜橙黄酮可能通过阻滞细胞周期和影响相关基因的表达达到在斑马鱼体内模型和HUVECs体外模型的抗血管新生作用。

制备^[3]

一种甜橙黄酮的合成方法，包括以下步骤：

步骤1)合成3，4-二甲氧基苯甲酰乙酸乙酯

按乙酰乙酸乙酯∶纯化水∶质量浓度为30％的氢氧化钾溶液∶3，4-二甲氧基苯甲酰氯∶氯化铵＝1∶5.69∶2.21∶1.54∶0.415的质量比准备上述原料。其中，乙酰乙酸乙酯的质量为65克。将65克乙酰乙酸乙酯加入220克的纯化水中，冷却至0～5℃；向溶液中加入21ml质量浓度为30％的氢氧化钾溶液，调节溶液pH至10～11，然后同时滴加剩余质量浓度为30％的氢氧化钾溶液和全部3，4-二甲氧基苯甲酰氯，保持反应温度不超过10℃，滴加完升温至25℃，保温反应5小时，加入氯化铵淬灭反应，继续搅拌20小时，最后加入剩余的纯化水，搅拌、静置、分层、收集下层并用无水硫酸钠进行干燥，得113克油状液体3，4-二甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；

步骤2)制备甜橙黄酮粗品

将113克3，4-二甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和其质量0.814倍量的3，4，5-三甲氧基苯酚混合均匀，保持真空度在0.08MPa-0.09MPa，温度为100℃～105℃，反应6小时，反应完成后冷却至60℃；加入0.7倍量的乙醇搅拌，静置冷却至室温，抽滤得86克甜橙黄酮粗品；

步骤3)制备甜橙黄酮精品

将86克甜橙黄酮粗品溶解至其质量10倍量的乙醇中溶解，并加入8克活性炭，脱色1小时，抽滤除去活性炭，并将溶液浓缩至原体积的三分之一，放置结晶，过滤得74克甜橙黄酮精品。

主要参考资料

[1] 甜橙黄酮对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

[2] 甜橙黄酮对斑马鱼及人脐静脉内皮细胞抗血管新生活性的作用

[3] CN201811447531.X一种甜橙黄酮的合成方法