慢病毒浓缩试剂盒

简介操作步骤

慢病毒浓缩试剂盒性质、用途与生产工艺

简介慢病毒浓缩试剂盒对所有类型的慢病毒颗粒进行简单快速的浓缩。该试剂盒操作简单，仅需将5×浓缩液与慢病毒上清按比例混合并孵育一段时间，正常转速离心，即可得到浓缩的慢病毒颗粒，回收率高达90%以上，可提高100倍病毒滴度。
操作步骤
1.病毒包装成功后，收集慢病毒上清液，0.45μm滤膜过滤，去除细胞和碎片。
滤膜过滤需使用低蛋白吸附的纤维素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜。切忌用硝酸纤维素膜（NC）。
2.将慢病毒上清液与试剂盒中的浓缩液按照体积比4:1的体积混合（上清液4份，浓缩液1份），4℃孵育2h或过夜。刚开始时每隔30min混匀一下，混匀进行3次。
延长孵育时间可以提高回收率。慢病毒颗粒在4℃可以稳定保存数天。
3.于4℃，4000g离心25min。
4.小心去除上清，不要剧烈晃动管子，一般可见白色沉淀（有时沉淀不可见）。
5.用初始体积（原上清液体积）1/10-1/100的DMEM或PBS重悬病毒颗粒，小心吹打均匀，重悬沉淀物。
6.重悬后的病毒以50µl/管分装，于-80℃冰箱保存。

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