荧光染料 理化性质 使用方法

细胞膜红色荧光染料 DID

细胞膜红色荧光染料 DID,,结构式
细胞膜红色荧光染料 DID
  • CAS号:
  • 英文名:Cell membrane red fluorescent dye DID
  • 中文名:细胞膜红色荧光染料 DID
  • CBNumber:CB55805779
  • 分子式:
  • 分子量:0
  • MOL File:Mol file

细胞膜红色荧光染料 DID性质、用途与生产工艺

  • 荧光染料 DiI、DiO、DiD 和 DiR 属于长链二烷基羰花青化合物,是一系列亲脂性的荧光染料,可用于细胞膜和其它脂溶性生物结构染色,是一类环境敏感型荧光染料。当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数,极性依赖性的荧光和很短的激发寿命。
    DiD 是 DiI 的衍生物,具有明显往红光迁移的激发和发射光谱,这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD 可被 633nm 的氦-氖(He-Ne)激光所激发,呈红色荧光,在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,进入细胞后,染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞染色。
  • 理化性质 红色或紫色或深蓝色固体,溶于DMF,DMSO,乙醇。
  • 使用方法

    1. 染色液制备
    (1)配置DMSO或EtOH储存液:储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1~5 mM。注:a、未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融,可稳定保存6个月。b、发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。
    (2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 μM的工作液。注:工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化

    2. 悬浮细胞染色
    (1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
    (2)37℃孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
    (3)孵育结束,按1000~1500 rpm离心5 min。
    (4)倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    (5)重复(3),(4)步骤两次以上。

    3. 贴壁细胞的染色
    (1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    (2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
    (3)在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    (4)37℃孵育细胞2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
    (5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10 min,然后吸干培养基。

    4. 显微镜检测
    (1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择: XF23-Omega, 31001-Chroma。
    (2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:
    a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
    b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
    c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005

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