异绿原酸A

异绿原酸A（Isochlorogenic Acid A）3,5-二咖啡酰奎宁酸，属咖啡酰奎尼酸类中二咖啡酰奎尼酸类（Dicaffeoylquinic Acids，DCQAs）。咖啡酰奎尼酸类化合物是由奎尼酸和不同数目的咖啡酸酯化形成的一类天然化合物。二咖啡酰奎尼酸类在植物界分布较广，异绿原酸A在菊科、忍冬科、豆科等植物中都广泛存在。

异绿原酸A对DPPH和羟基自由基清除率分别高达97.04%、60.01%，在皮肤荧光斑马鱼模型中表现出良好的抗氧化活性。此外，异绿原酸A能够抑制超氧阴离子和白细胞迁移产生的炎症反应，并呈剂量依赖性。

付运星的研究结果表明，异绿原酸A可以通过调节犬肾细胞（MDCK）中的Toll样受体3（toll-like receptor，TLR3）信号通路发挥其抗CDV活性，治疗指数（TI）为5.7。Yu等人研究证实，异绿原酸A和异绿原酸B（isochlorogenic acid B，ICAB）对流感病毒A具有较强的抑制作用，其IC50值高于奥司他韦。Robison等人发现，异绿原酸A能抑制人类免疫缺陷病毒整合酶的活性，阻断病毒的复制过程。Karar等人研究表明，异绿原酸A及绿原酸衍生物以剂量依赖方式抑制流感病毒神经氨酸酶活性。Shah等人通过分子对接发现异绿原酸A与新型冠状病毒主要蛋白酶Mpro表现出良好的亲和力，表明异绿原酸A可能具有抗SARS-CoV-2活性。基于异绿原酸A可通过多种途径发挥抗病毒活性，并且能够抑制麻疹病毒属成员CDV的增殖，调节机体免疫功能，因此异绿原酸A成为抗PPRV潜在药物极具潜力。

异绿原酸A的降解过程呈现明显的pH及温度依赖性，在酸性环境中异绿原酸A的稳定性较好，溶液碱性增强及温度升高均会使降解反应速度加快；而初始药物浓度及氧化对降解速率的影响不明显；金属离子Fe3+、Fe2+的引入以及紫外光均会使异绿原酸A的降解反应速率加快。异绿原酸A的活化能为96.71kJ/mol，表明异绿原酸A在中性水溶液中的降解反应对于温度较为敏感，降解反应随着温度升高而大大加快。因此，异绿原酸A及含有该成分的相关药物应在低温条件下保存，在开发、生产及使用含有异绿原酸A药物时应使用弱酸性的条件，并控制容器及溶剂中存在的铁离子，避免与紫外光接触，防止其降解。在碱性条件下发现异绿原酸A产生两种降解产物，但目前暂无对异绿原酸A降解产物的研究。异绿原酸A属于二咖啡酰奎尼酸，为两分子咖啡酸和一分子奎宁酸结合而成的酯类化合物。从异绿原酸A结构组成出发，推测其两种降解产物可能为咖啡酸和奎宁酸。

取金银花10.0kg，用10倍量70%乙醇回流提取2h，滤渣加8倍量70%乙醇回流提取1h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.05（25℃）。搅拌加入乙醇至体积分数为80%，静置过夜（12 h），滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加水稀释至1∶1，静置过夜（12 h），滤过，弃去不溶物，即得金银花提取液，备用。异绿原酸A、B和C的转移率为92.6%。再经D-101树脂洗脱纯化，再选择反相硅胶（YMC-C18，50 μm）和硅胶为填料进行色谱分离，最后将乙腈溶液作为A相，0.5%甲酸水溶液为B相，制备分离分别得到异绿原酸A、B和C。

1、色谱条件：Waters SunFire C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相为0.4%磷酸溶液：乙腈为87∶13，流速1.0mL/min，进样量10μL，检测波长326nm，柱温40℃。

2、混合对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品10.390mg、异绿原酸A对照品9.995mg，分别置25mL棕色容量瓶中，加50%甲醇超声溶解稀释至刻度，制成质量浓度分别为415.60、399.80μg/mL的绿原酸、异绿原酸A对照品的储备液。分别精密移取绿原酸、异绿原酸A各2mL定容于25mL的棕色容量瓶中，制成每1mL含绿原酸33.248 μg、异绿原酸A31.984μg的混合对照品溶液。

3、供试品溶液的制备：精密称定过五号筛的金银花细粉5.0g，加15倍量乙醇超声、回流提取，抽滤，减压浓缩至浸膏，用50%甲醇溶解并定容至50mL，摇匀，4000r/min离心12min，取上清液1mL，用50%甲醇定容至25mL后，再取3mL定容至10mL的棕色容量瓶中备用。