酸水解酪蛋白的应用

背景及概述^[1][2]

酸水解酪蛋白是以优质的酪蛋白为原料，用强酸深度水解、脱色、脱盐、浓缩、喷雾干燥而成的白色或淡黄色粉状物。其极易吸潮、易溶于水、具有酱香味，是酪蛋白的酸性分解物，可以分解到氨基酸的程度。

本品广泛应用于医药制药、生物发酵、动物饲料、植物组织培养、化妆品、烟草工业（增香）、食品卫生检验等专业与各类培养基的配置，特别是配置各类半综合培养基时，本产品是主要的基础成分，如：半综合百日咳培养基、半综合流脑培养基、多糖体流脑半综合液体培养基、金黄色葡萄球菌A蛋白培养基，还有硫乙醇酸盐无菌试验培养基，及厌氧菌培养基和活性炭琼脂培养基等等，均以酸水解酪蛋白为基础。

制备^[1]

1水解

准确称取100g酪蛋白加入到1000ml三颈瓶中，然后依次加入100ml的蒸馏水搅拌均匀、100ml 12mol/L的浓盐酸搅拌均匀，安装上冷凝管、电动搅拌、电热套，边搅拌边升温，当温度达到90℃时溶液整体沸腾，持续恒温搅拌水解 3hr，待溶液水解彻底无酪蛋白颗粒后停止水解。

2过滤

在第1步水解好的水解液中加入100ml蒸馏水，用80目尼龙网过滤。

3浓缩

将上述过滤液分次加入到1000ml圆底烧瓶中，用旋转蒸发仪减压到 650mmHg浓缩至膏状，通过负压加入100ml蒸馏水，降低旋转蒸发仪转速，使其 完全溶解。然后再次减压浓缩至膏状，如此反复浓缩洗涤三次，即可完成洗涤，此时pH值3.5。

4脱色

将上述洗涤好的水解液加入按固含量质量分数5％的活性炭回流4.0小时， 用抽滤瓶、布氏漏斗热减压650mmHg过滤，滤液呈浅黄色，pH值为2.0。

5脱酸

脱色后的浅黄色滤液经强碱性阴离子201×7(717)树脂一步法交换，收集pH值6.5～7.0段的交换液组分。

6干燥

经树脂交换好地溶液浓缩后、在压力15MPa、温度120℃下喷雾干燥，所得 产品呈乳白或淡黄色。

应用^[2-3]

CN201010122050.9公开了一种产白藜芦醇细胞的制备方法及其专用悬浮培养基，本发明的专用悬浮培养基是在B5基本培养液或NN1969培养液中添加如下物质得到的培养基：酸水解酪蛋白、NAA、KT、BA和碳源；其中酸水解酪蛋白的终浓度为0.015-0.030g/100ml、NAA的终浓度为0.01-1.00mg/L、KT的终浓度为0.1-2.00mg/L、BA的终浓度为0.05-1.00mg/L。本发明将外植体先诱导愈伤组织；再将愈伤组织转入增殖培养基中培养；然后利用紫外线照射的诱导方法确定高产白藜芦醇的葡萄基因型。然后再确定高产白藜芦醇的器官类型。最后通过悬浮培养，大量扩繁细胞并诱导处理，最终获得高产白藜芦醇细胞。

CN201010190788.9公开了一种番石榴焦腐病菌产孢培养基，由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成。分别以葡萄糖为碳源，以酸水解酪蛋白为氮源，提供了该菌产孢所需要的碳元素和氮元素；加入的生长因子—燕麦中的维生素则是调节微生物正常代谢所必需的；满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基，培养7天产孢量4×10³个孢子/25毫升培养基。

生物活性研究^[4]

白贵杰等人探索了不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌（脑膜炎球菌）荚膜多糖产量的影响。方法分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度(A600 nm值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide, CTAB）溶液对多糖沉淀效果的影响。

结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义（P>0.05）,但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义（P<0.05）,而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义（P<0.05）。

高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。

主要参考资料

[1] [中国发明,中国发明授权] CN200710018245.7 酸水解酪蛋白的生产方法

[2] CN201010122050.9一种产白藜芦醇细胞的制备方法及其专用悬浮培养基

[3] CN201010190788.9番石榴焦腐病菌产孢培养基

[4] 白贵杰,张新庄,张丽芝,杨田瑶,任克明,张轶,侯亚莉,王晶,刘方蕾,罗树权,沈荣.不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响[J].微生物学免疫学进展,2019,47(03):27-31.