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凝血酶

供应商 方法名称 仪器设备 应用范围 方法原理 试剂 试样制备 操作步骤

方法名称

凝血酶冻干粉针—凝血酶的测定—酶效价测定法

仪器设备

仪器设备： 试样制备： 1. 纤维蛋白原溶液的制备
取纤维蛋白原约30mg，精密称定，用0.9％氯化钠溶液1.5ml溶解，加凝血酶溶液0.1ml（约3单位），快速摇匀，室温放置约1小时至完全凝固，取出凝固物，用水洗至洗出液加硝酸银试液不产生混浊，在105°c干燥3小时，称取重量，计算纤维蛋白原中汉凝固物质的含量（％），然后用0.9％氯化钠溶液制成含0.2％凝固物的纤维蛋白原溶液，用0.05mol/l磷酸氢二钠或磷酸二氢钠溶液调节ph值至7.0～7.4，再用0.9％氯化钠溶液稀释成含0.1％凝固物的溶液，备用。
2. 标准曲线的制备
取凝血酶标准品，用0.9％氯化钠溶液分别制成每1ml中含5.0单位，6.4单位，8.0单位，10.0单位的标准品溶液。另取内经1cm，长10cm的 试管4支，各精密加入纤维蛋白原溶液0.9ml，置37±5°c的水浴中保温5分钟，再分别精密量取上述4种浓度的标准品溶液各0.1ml，迅速加入上述各试管中，摇匀，立即计时，置37±5°c的水浴中，观察纤维蛋白的 初凝时间，每种浓度测5次，求平均值（5次测定中的最大值与最小值的差不得超过平均值的10％，否则重测）。标准品溶液的浓度应控制凝结时间在14～60秒为宜。在双对数坐标纸上，以标准品效价（单位）为横坐标，凝结时间（秒）为纵坐标，计算回归方程。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

应用范围

本方法采用酶效价测定法测定凝血酶冻干粉针中凝血酶的效价。
本方法适用于凝血酶冻干粉针。

方法原理

本法系比较不同浓度凝血酶标准品（s）与供试品（t）对纤维蛋白原的初凝时间，以测定供试品的效价。

试剂

1. 纤维蛋白原
2. 0.9％氯化钠溶液
3. 0.05mol/l磷酸氢二钠或磷酸二氢钠溶液

试样制备

1. 纤维蛋白原溶液的制备
取纤维蛋白原约30mg，精密称定，用0.9％氯化钠溶液1.5ml溶解，加凝血酶溶液0.1ml（约3单位），快速摇匀，室温放置约1小时至完全凝固，取出凝固物，用水洗至洗出液加硝酸银试液不产生混浊，在105°c干燥3小时，称取重量，计算纤维蛋白原中汉凝固物质的含量（％），然后用0.9％氯化钠溶液制成含0.2％凝固物的纤维蛋白原溶液，用0.05mol/l磷酸氢二钠或磷酸二氢钠溶液调节ph值至7.0～7.4，再用0.9％氯化钠溶液稀释成含0.1％凝固物的溶液，备用。
2. 标准曲线的制备
取凝血酶标准品，用0.9％氯化钠溶液分别制成每1ml中含5.0单位，6.4单位，8.0单位，10.0单位的标准品溶液。另取内经1cm，长10cm的 试管4支，各精密加入纤维蛋白原溶液0.9ml，置37±5°c的水浴中保温5分钟，再分别精密量取上述4种浓度的标准品溶液各0.1ml，迅速加入上述各试管中，摇匀，立即计时，置37±5°c的水浴中，观察纤维蛋白的 初凝时间，每种浓度测5次，求平均值（5次测定中的最大值与最小值的差不得超过平均值的10％，否则重测）。标准品溶液的浓度应控制凝结时间在14～60秒为宜。在双对数坐标纸上，以标准品效价（单位）为横坐标，凝结时间（秒）为纵坐标，计算回归方程。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤

取本品3评，分别精密称定其内容物的重量，每瓶按标示量分别加0.9％氯化钠溶液制成与标准曲线浓度相当的溶液，精密吸取0.1ml，按标准曲线的制备方法平行测定5次，求出凝结时间的平均值（误差要求同标准曲线），用回归方程求得效价（单位）
凝血酶生产厂家