小鼠P选择素（P-Selectin）ELISA试剂盒

泉州市睿信生物科技有限公司是集研发、生产、销售、服务及品牌代理为一体的生物技术公司，目前可提供各种抗体、免疫学试剂盒、生化试剂、分子生物学试剂等高品质产品及服务，涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

睿信生物拥有完善的技术服务团队，严格的技术服务流程，获得客户的一致好评。 

 我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。

  试剂盒组成：

注：标准品浓度依次为：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL.

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

· 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

· 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

· 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

· 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

· 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

· 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

· 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

· 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

· 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项：

· 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡60-120分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

· 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

· 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间hao控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

· 请每次测定的同时做标准曲线，hao做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔i孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

· 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

· 底物请避光保存。

· 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶读数为准.

· 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

· 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。