"BALB/3T3 clone A31 Cell|小鼠胚胎成纤维细胞
细胞背景资料:胚胎;成纤维;自发永生;雄性;BALB/c
细胞形态:成纤维细胞样
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够GAO,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞生长:贴壁
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CHO K1细胞类似产品::RT-112细胞、RINm5F细胞、H-719细胞
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
BALB/3T3 clone A31 Cell|小鼠胚胎成纤维细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养过程中,总是会出现各种意想不到的问题,一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法,希望对细胞培养初学操作者有所帮助:1)观察细胞状态:贴壁细胞密度达到85-90%,即可以细胞冻存形式进行保藏,拍照,记录细胞状态;2)细胞清洗:培养皿表面消毒后,转移至生物安全柜中,去除培养皿中培养液,加入12mlPBS,轻轻摇晃培养皿清洗细胞,随后吸除PBS清洗液;3)细胞消化:将2ml胰酶加入培养皿中,完全覆盖细胞,置于显微镜下观察(期间禁止摇晃培养皿),当细胞刚开始脱落时,立即转移至生物安全柜中,除去大部分胰酶,剩余约0.5ml胰酶,转移至培养箱内继续消化,每30秒肉眼观察细胞状态,至细胞成流沙状完全脱落,转移至生物安全柜中,加入12ml完全培养基,终止消化;4)细胞离心:将终止消化后的细胞悬液吹打均匀,吸取至15ml离心管中,1000r/min(110g),离心3min;5)细胞冻存:离心后去除细胞上清液,按照冻存细胞量5*10^5/ml,吸取冻存液重悬细胞沉淀,吹打均匀后分装至相应的冻存管中,进行冻存;6)细胞保藏:冻存管做HAO标记,放至程序降温盒中,于4℃冰箱放置30min,转移至-80℃超低温冰箱过夜,将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。
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细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
细胞培养中的污染分为两类,化学污染和生物污染;生物污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染,和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。细菌、霉菌和酵母到处存在,它们能在合适的环境中非常快速的生长。这些污染比较容易观察到,它们往往会使其污染的培养液产生可见的变化,或者通过显微镜观察就可以看见。由于病毒有种属异性,所以病毒污染的概率比较小。但是病毒污染难于发现,因为病毒颗粒别微小,一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。由于病毒一般潜伏在细胞内,对整个细胞培养不是致死的,所以它可能会使研究人员长期得到受病毒影响的细胞的实验结果。1956年Robinson及其同事首次发现细胞培养中的支原体污染。90年代初的一个调查发现,在美国培养的细胞中,至少有15%被支原体污染。由于支原体没有细胞壁,在细胞培养液中几乎是透明的,同时对常用于细胞培养中的抗生素不敏感,不引起pH变化,不使培养液浑浊,所以支原体污染不容易被发现,但是其存在会影响实验的结果。培养多种细胞时操作不当,会导致细胞的交叉污染。由于不同细胞的生产速率不同,污染的生长速率快的细胞终会完全取代被污染的细胞。
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