"TR146 Cell|人食管鳞癌细胞
细胞背景资料:食管鳞癌
细胞形态:上皮细胞样
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够GAO,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞生长:贴壁
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DMS114细胞类似产品::UPCI:SCC090细胞、NCI-322细胞、SCI1细胞
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
TR146 Cell|人食管鳞癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
悬浮细胞不容易转染:悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞GAO出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次,脂质体试剂的毒性较大,这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外,悬浮细胞不易培养,易死亡,也给细胞转染造成了一定的困难。为了提GAO悬浮细胞的转染效率,可以使用非脂质体的转染试剂,如纳米材料的。也可以使用电转染方法,针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的,电击对细胞有一定的损伤,ZuiHAO选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂,可以将电击对细胞的伤害降到Zui低,悬浮细胞不易转染,选对试剂及良HAO的细胞培养环境才是关键。
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细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
细胞系永生化原理介绍:多数正常细胞的寿命是有限的,能传20-100代,但有些细胞,尤其是来自啮齿类或来自多数肿瘤的细胞,可以产生具有无限寿命的连续细胞系。啮齿类动物细胞在分离时核型是正常的,在传到12代左右以后可能出现危相,多数细胞在这个阶段死亡了,但少数细胞存活下来,并拥有了更GAO的生长率,成为连续细胞系。目前认为永生化是一个多步骤的过程,包括一系列细胞周期的调节基因(如Rb和p53)失活。目前主要从两个方向进行操作,病毒基因致永生化和端粒酶诱导的永生化,其原理如下:SV40 LT基因常用于诱导永生化。这个基因的产物-T抗原,可与Rb和p53结合。这样不仅使细胞增殖的寿命得以延长,同时也限制了如p53这样基因的DNA监控活性,从而使基因组的不稳定性增加,也增加了向永生化发展的进一步突变的机会(如上调端粒酶或下调端粒酶抑制物的活性)。用含可调节启动子的端粒酶基因进行转染,足以形成永生化细胞。这些基因中已被广泛应用的有:EBV用于淋巴母细胞样细胞;SV40 LT用于黏附细胞,如成纤维细胞(Mayne et al., 1996)、 角质形成细胞(Steinberg,1996) 和内皮细胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT则用于间充质干细胞和其他一些细胞。
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