"SUM159PT Cell|人乳腺癌细胞
细胞背景资料:乳腺癌;女性
细胞形态:上皮细胞样
细胞接收操作说明:请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。本公司细胞发货有四种形式:T25培养瓶(一般是贴壁细胞使用,悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多,当然,有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞,但是,长期经验来说,贴壁细胞容易发生形态变化,估计是细胞培养空间狭小,血清不足导致(Zui主要是怕运输延误导致这些情况发生),个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用,主要是冬天天气冷,温度低于4℃的地方,都要考虑冻存细胞)。T25培养瓶:是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后,拆开包装T25培养瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。首先将T25中培养基取出装HAO备用,如细胞密度GAO于80%,可以直接消化传代,相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。离心管:是用15ml离心管发货的形式,只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。首先将T25中培养基取出装HAO备用(如果实验室没有T25培养瓶,可以暂时T75培养瓶,加入10-15ml培养基,建议10ml培养基,也可以使用T175培养瓶,加入50-60ml培养基,培养瓶越大,需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话,ZuiHAO不用大瓶子,先用小瓶子养起来再换大的,不然会长得很慢,严重的,会导致细胞死亡等危险),平衡完成后,离心(1000rpm,3min)收集细胞,弃上清,用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中,放回培养箱继续培养。干冰:是用本公司冻存液冻存细胞后,直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
细胞生长:贴壁
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NCIN87细胞类似产品::Cloudman S91 melanoma clone M-3细胞、RBMEC细胞、HCC1954BL细胞
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
SUM159PT Cell|人乳腺癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养时分布不均匀,通常操作步骤:做细胞生物学实验,细胞铺板大概是我们Zui常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间秃。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶润洗一遍(25cm2培养瓶或6孔板),弃掉胰酶,37度消化2-3分钟或室温消化5min左右,镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够,延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种,直接用100微升移液器吸取细胞悬液,沿孔壁(稍离开一点孔底即可,不要离底太GAO)直接接入,移液器不需完全打到Zui大,轻轻按下即可,每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不HAO),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板,可采用将每个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔依此类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板HAO掌握,效果没有96孔板HAO。培养瓶里面加HAO细胞以后(比如传代HAO/分HAO细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
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细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
细胞培养中的污染分为两类,化学污染和生物污染;生物污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染,和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。细菌、霉菌和酵母到处存在,它们能在合适的环境中非常快速的生长。这些污染比较容易观察到,它们往往会使其污染的培养液产生可见的变化,或者通过显微镜观察就可以看见。由于病毒有种属异性,所以病毒污染的概率比较小。但是病毒污染难于发现,因为病毒颗粒别微小,一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。由于病毒一般潜伏在细胞内,对整个细胞培养不是致死的,所以它可能会使研究人员长期得到受病毒影响的细胞的实验结果。1956年Robinson及其同事首次发现细胞培养中的支原体污染。90年代初的一个调查发现,在美国培养的细胞中,至少有15%被支原体污染。由于支原体没有细胞壁,在细胞培养液中几乎是透明的,同时对常用于细胞培养中的抗生素不敏感,不引起pH变化,不使培养液浑浊,所以支原体污染不容易被发现,但是其存在会影响实验的结果。培养多种细胞时操作不当,会导致细胞的交叉污染。由于不同细胞的生产速率不同,污染的生长速率快的细胞终会完全取代被污染的细胞。
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SUM159PT Cell|人乳腺癌细胞
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