"HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma] Cell|人皮肤鳞癌细胞
细胞背景资料:皮肤鳞癌;男性
细胞形态:上皮细胞样
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够GAO,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞生长:贴壁
BMDC细胞类似产品::KGN细胞、AHH-1细胞、MDA MB 231细胞
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Sf21细胞类似产品::U-251_MG细胞、MZCRC1细胞、SK-Mel 2细胞
CHP100细胞类似产品::NIH:OVCAR-5细胞、Z310细胞、HSC6细胞
LNCaP C4-2B细胞类似产品::BNCL2细胞、PCI-4M细胞、NCIH1618细胞
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma] Cell|人皮肤鳞癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养时分布不均匀,通常操作步骤:做细胞生物学实验,细胞铺板大概是我们Zui常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间秃。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶润洗一遍(25cm2培养瓶或6孔板),弃掉胰酶,37度消化2-3分钟或室温消化5min左右,镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够,延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种,直接用100微升移液器吸取细胞悬液,沿孔壁(稍离开一点孔底即可,不要离底太GAO)直接接入,移液器不需完全打到Zui大,轻轻按下即可,每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不HAO),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板,可采用将每个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔依此类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板HAO掌握,效果没有96孔板HAO。培养瓶里面加HAO细胞以后(比如传代HAO/分HAO细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
COV-434细胞类似产品::HT-1376细胞、PNT-1A细胞、B16BL6细胞
MCA-205细胞类似产品::HEK-293 c18细胞、NCI-SNU-1040细胞、Nb2a细胞
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细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
细胞系永生化原理介绍:多数正常细胞的寿命是有限的,能传20-100代,但有些细胞,尤其是来自啮齿类或来自多数肿瘤的细胞,可以产生具有无限寿命的连续细胞系。啮齿类动物细胞在分离时核型是正常的,在传到12代左右以后可能出现危相,多数细胞在这个阶段死亡了,但少数细胞存活下来,并拥有了更GAO的生长率,成为连续细胞系。目前认为永生化是一个多步骤的过程,包括一系列细胞周期的调节基因(如Rb和p53)失活。目前主要从两个方向进行操作,病毒基因致永生化和端粒酶诱导的永生化,其原理如下:SV40 LT基因常用于诱导永生化。这个基因的产物-T抗原,可与Rb和p53结合。这样不仅使细胞增殖的寿命得以延长,同时也限制了如p53这样基因的DNA监控活性,从而使基因组的不稳定性增加,也增加了向永生化发展的进一步突变的机会(如上调端粒酶或下调端粒酶抑制物的活性)。用含可调节启动子的端粒酶基因进行转染,足以形成永生化细胞。这些基因中已被广泛应用的有:EBV用于淋巴母细胞样细胞;SV40 LT用于黏附细胞,如成纤维细胞(Mayne et al., 1996)、 角质形成细胞(Steinberg,1996) 和内皮细胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT则用于间充质干细胞和其他一些细胞。
EFM192C细胞类似产品::C3H/10T1/2-clone8细胞、LS411N细胞、H3255_DA细胞
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NCI-H1404细胞类似产品::THP-1细胞、159PT细胞、XWLC-05细胞
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