"LK2 Cell|人肺鳞癌细胞
细胞背景资料:肺鳞癌;男性
细胞形态:上皮细胞样
传代培养及其操作步骤:原代细胞培养成功以后,需要进行分离培养,否则细胞会因生存空间不足或密度过大,营养障碍,影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株),可以进行细胞克隆,易于保存,但可能丧失一些殊的细胞和分化征。传代细胞形成细胞株的Zui大利处在于提供了大量持久的实验材料,便于实验。【操作步骤】1)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液;2)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜;3)置37℃孵箱或室温(25℃温度)下进行消化,2~5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察,当发现胞质回缩、细胞间隙增大后,应立即中止消化;4)吸出消化液,向瓶内加入Hanks液少量,轻轻转动培养瓶,把残留消化液冲掉,然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培养液,终止消化;5)使用弯头吸管,吸取瓶内培养液,按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔,以防用力过猛损伤细胞;6)用计数板计数后,分别接种于新的培养瓶中,置CO2培养箱中进行培养;7)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2~3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面,即可使用;也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】1)掌握HAO细胞消化的时间,消化时间过短时,细胞不宜从瓶壁脱落,过长的消化会导致细胞脱落、损伤;2)掌握HAO消化浓度,当消化液浓度过GAO时,消化时间应缩短,过低时细胞消化时间相对延长。
细胞生长:贴壁
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
LK2 Cell|人肺鳞癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
传代的操作步骤注意事项:1)操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。2)点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。3)操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。4)不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。5)瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。贴壁细胞传代的操作步骤:1)吸除培养瓶内旧培养液。2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。3)置温箱中2-5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。4)吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。5)用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。6)计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。悬浮细胞传代的操作步骤:1)吸出细胞培养液,放入离心管中,离心1000rpm5分钟。2)吸掉上清液,加入适量之新鲜培养基,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。
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细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
经过40-50次分裂的渡过第二次死亡危机的细胞,称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(FiniteCellLine);已获无限繁殖能力的细胞系,称连续或无限细胞系(InfiniteCellLine)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,可能成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有永生性(不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致死;有的有永生性,异体接种有致瘤性,说明已恶性化。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称亚系(Subline)。这是现有细胞系中多的一类,中国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成,多呈类上皮型细胞,常已传几十代或百代以上,并具有不死性和异体接种致瘤性,丧失接触抑制能力。对已建成的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称;细胞的命名无严格统一规定,大多采用有一定意义缩写字或代号表示。但不论什么形式,均不宜太长,以便记忆和了解。
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