"LNCaP clone FGC Cell|人前列腺癌细胞
细胞背景资料:人前列腺癌细胞LNCaP克隆FGC是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨淋巴结针刺活检中分离,该患者经确诊为前列腺癌转移。 这株细胞对5-α-二睾酮(生长调节子和酸性脂酶产物)有响应。这株细胞并不形成一致的单层,而是形成集落,在传代时可以用滴管反复吹吸打碎。它们仅仅轻轻地吸附在基底上,不形成汇合,很快使培养基变酸。生长很慢。传代后48小时内不应扰动。当培养瓶封包后,多数细胞从培养瓶底分离,悬浮在培养基中。收到后,在通常培养单层细胞的条件下培养24到48小时,以合细胞再贴壁。
细胞形态:上皮细胞样
体内细胞培养及其操作步骤:【瘤细胞悬液接种】1)无菌选取生长良HAO(有光泽,淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞;2)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨,经80~100目筛网过滤成细胞悬液;3)培养细胞应用PBS洗两遍;4)计数并调整细胞浓度至107~108/ml;5)常规消毒后,于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml/部位,>106细胞)。初次接种成功率低,细胞数尽可能多一些;6)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期,以后随着传代潜伏期逐渐缩短,Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤细胞,将这种腹水反复传代,即可成为腹水瘤。初次传代时,腹水常呈血性(含大量红细胞),反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。1)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤,进行细胞计数;2)消毒动物,左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞;3)接种腹水瘤细胞后约7~12d,待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9号针头抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml;4)抽取的腹水经3000rpm离心15min,收集上清,分装冻存备用。
细胞生长:贴壁
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
LNCaP clone FGC Cell|人前列腺癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题,客户遇到的问题从细胞生长角度来说,针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因,我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因:细胞本身的状态》1)细胞传代次数多,细胞老化;2)细胞的接种量:接种量过低,细胞生长缓慢;3)细胞传代时间过晚:细胞中毒,影响传代后的细胞生长;4)胰酶消化时间过长或过短:时间过长,细胞死亡;时间过短,细胞未完全分离而成团,细胞死亡;5)细胞的冻存与复苏:慢冻速融。污染:1)支原体污染;2)霉菌污染;培养基或血清:1)更换血清或培养基之前未进行验证;2)选择的培养基是否合适;3)培养基配制是否准确无误;培养环境:1)CO2供应是否正常;2)培养箱或摇床温度控制是否正确;解决方法:根据以上四个方面的可能原因,做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态:如传代次数、接种量等;2)避免产生污染(用正规、合法、可溯源的血清);3)要用合适的血清或培养基,ZuiHAO经过验证;4)注意实验室的环境;二、培养细胞死亡》可能原因:1)培养箱内无CO2;2)培养箱内温度波动太大;3)细胞冻存或复苏过程中损伤;4)培养液渗透压不正确;5)培养液中有毒代谢产物堆积;解决方法:1)检测培养箱内CO2;2)检查培养箱内温度;3)取新的保存细胞种;4)检测培养液渗透压;5)换入新鲜培养液。
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细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁生长
经过40-50次分裂的渡过第二次死亡危机的细胞,称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(FiniteCellLine);已获无限繁殖能力的细胞系,称连续或无限细胞系(InfiniteCellLine)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,可能成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有永生性(不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致死;有的有永生性,异体接种有致瘤性,说明已恶性化。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称亚系(Subline)。这是现有细胞系中多的一类,中国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成,多呈类上皮型细胞,常已传几十代或百代以上,并具有不死性和异体接种致瘤性,丧失接触抑制能力。对已建成的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称;细胞的命名无严格统一规定,大多采用有一定意义缩写字或代号表示。但不论什么形式,均不宜太长,以便记忆和了解。
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