"ES-2 Cell|人卵巢癌细胞
细胞背景资料:ES-2细胞系源于一位47岁黑人女性的临床卵巢透明细胞癌手术标本。该细胞对中低剂量的阿霉素,顺铂,双乙基亚硝脲,表鬼臼毒素吡喃葡糖苷等化疗药物有一定耐药性。该细胞少量表达糖蛋白P。
细胞形态:上皮细胞样
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够GAO,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞生长:贴壁
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
ES-2 Cell|人卵巢癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养更HAO经验详解:1)收到细胞,首先要镜检:观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很HAO,观察细胞密度,有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样,主要是贴壁牢固问题。比如293T,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶子里面,会发生大片的脱落,细胞聚集在一起,但是细胞生长还是正常的,通过离心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察,细胞初步没有问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中大部分培养基,仅保留5到10mL培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下,会调整为静止期,或者慢速生长期,恢复37度的环境至少3个小时左右,才能重新调整到接近对数生长期的状态,在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%,并且细胞状态很HAO时,则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快,状态稳定,不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶;对于生长较慢,细胞比较薄,状态容易波动的细胞类型,一次少传些,每瓶细胞密度大些,便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞,次处理也可以依照第二种情况。
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细胞传代方法:1:3传代,2-3天传一次
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁生长
细胞传代比例:对于有限细胞系,传代时以二、四、八或十六倍(传代比率分别是2、4、8和16)降低细胞密度,计算群体倍增数更容易(即分别是传代比率2对应1次倍增,4对应2次倍增,8对应3次倍增,16对应4次倍增);例如,一传八的培养物需要3次倍增才能达到原来相同的细胞密度。脆弱的或生长缓慢的细胞系通常一传二,而有活力的,生长快速的细胞系可以一传八,甚至一传十六。有些连续细胞系可一传五十或一传100。一旦细胞系变为连续细胞系(通常经过150次或200次倍增以上),细胞浓度是主要参数,培养浓度应降至10(4)/ml--10(5)/ml之间。可选择传代间隔合适的传代比率或稀释度,或许为1周或2周,同时要保证:细胞密度不可稀释过低,使其延迟期合理(在24小时以内),可重新进入生长周期;而且在下次传代前不进人平台期。
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