A-431 Cells(赠送Str鉴定报告)|人皮肤鳞癌细胞

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细胞背景资料：该细胞源自一位患有皮肤鳞状细胞癌的８５岁女性，是GiardDJ等人建立的一系列细胞株中的一株。该细胞在免疫抑制小鼠体内可成瘤，在琼脂上培养可形成克隆；是一个超三倍体人细胞株。

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，HAO象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中Zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，GAO倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良HAO，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提GAO细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

细胞生长：贴壁

HFLS-RA细胞类似产品：：Evsa-T细胞、J774 A.1细胞、RAW 264.7细胞

HT 144细胞类似产品：：CNE1-LUC细胞、UMC-11细胞、PC-9细胞

MLE 12细胞类似产品：：MLA144细胞、MDA MB 453细胞、GM03569细胞

NCI-H920细胞类似产品：：HLEC-B3细胞、Gingival carcinoma Neck Metastasis细胞、CORL279细胞

Panc 3.27细胞类似产品：：J774细胞、P3JHR-1细胞、HS852.T细胞

A-431 Cells(赠送Str鉴定报告)|人皮肤鳞癌细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：２传代

HEM细胞类似产品：：SW 1116细胞、KASUMI6细胞、NCI-446细胞

CA-OV-3细胞类似产品：：HIT T15细胞、VK2 (E6/E7)细胞、L6565细胞

TCMK1细胞类似产品：：CMT.64细胞、OCI Ly1细胞、H-23细胞

CHO-ori细胞类似产品：：FL 62891细胞、X63-Ag 8.6.5.3细胞、HCASMC细胞

Immortalized Human Hepatocytes细胞类似产品：：H-7721细胞、H-774细胞、CaES-17细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

DH-82细胞类似产品：：PANC-03-27细胞、CMT167细胞、BC-009细胞

JB-6细胞类似产品：：H322细胞、NCIH740细胞、COLO 824细胞

J 82细胞类似产品：：RK-13细胞、MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)细胞、REC细胞

BT-325细胞类似产品：：SNU601细胞、Merwin Plasma Cell tumor-11细胞、NCI-H87细胞

Doubling time: ~50 hours (ATCC).细胞类似产品：：OV1/P细胞、HFL细胞、RBSMC细胞

VERO C 1008细胞类似产品：：IMCD3细胞、FDCP-1细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4细胞

细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：１)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加２-３ml ０.２５%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在１-２min)；２)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；３)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；４)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周２-３次)，待细胞密度达到８０%以后重复１项操作或者冻存；别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)１)收到细胞后请尽快更换为含１５%血清的新鲜培养基，如因殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加１０%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间Zui长不宜超过７２小时)；２)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请YOU先选择直径６cm的培养皿进行传代培养；３)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做HAO照片记录并联系实验室。

细胞冻存复苏材料与方法步骤：常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有３５L和５０L两种。使用时要注意以下几点：(１)一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-１９６℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。(２)液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。(３)在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更HAO。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(１２１°C蒸气GAO压消毒)，２mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为：(１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为３×１０６～１×１０７/mL之间。(３)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装１～１.５mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(４)将装HAO细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入４℃冰箱中２～３小时，再移至冰箱冷冻室内３～４小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放２小时，Zui后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

SK.OV.3细胞类似产品：：HME1细胞、NUGC2细胞、Emory University-2细胞

Mink Lung细胞类似产品：：NCI-H1915细胞、HCC-44细胞、LNCaP clone FGC细胞

H-2452细胞类似产品：：S-16细胞、hOMF细胞、BCaP 37细胞

RenCa细胞类似产品：：NIE 115细胞、SVOG细胞、MT-2细胞

MARC145细胞类似产品：：FRH-0201细胞、IPLB-SF-21-AE细胞、HCC2157细胞

Hep-3B细胞类似产品：：Hs445细胞、T24细胞、HOS/MNNG细胞

Centre Antoine Lacassagne-85-1细胞类似产品：：CHP-212细胞、Caco2BBe细胞、MDA330细胞

Pfeiffer细胞类似产品：：L-Wnt-3A细胞、OCILY7细胞、MFHL-2细胞

769P细胞类似产品：：AHH1细胞、AU-565细胞、H-1770细胞

T98G细胞类似产品：：RS4:11细胞、130T细胞、NSI/1-Ag4-1细胞

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LS 174T细胞类似产品：：HS 445T细胞、P3-NS1/1-Ag4-1细胞、L 540细胞

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451-LU细胞类似产品：：U-138 MG细胞、LY-R细胞、HOP92细胞

NK92-MI细胞类似产品：：MPP 89细胞、CHP 126细胞、BRL3A细胞

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MDA-MB-436细胞类似产品：：CCRF/CEM/0细胞、MRASMC细胞、SCC090细胞

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TK-10细胞类似产品：：Panc 03.27细胞、FLC-7细胞、Hep2细胞

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VMCUB-1细胞类似产品：：Huh 7.5.1细胞、NB1RGB细胞、NOR10细胞

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LL/2(LLc1)细胞类似产品：：CHL/IU细胞、MDA-MB-361细胞、SW 1463细胞

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UWB1289细胞类似产品：：A 2780 CP细胞、Panc_05_04细胞、NCIH2081细胞

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SU-DHL-10细胞类似产品：：BC-020细胞、Rat-2细胞、NCIH2170细胞

FCCH1024细胞类似产品：：751-NA细胞、KBM-7细胞、Emory University-3细胞

CTV-1细胞类似产品：：P3/NS1/Ag4-1细胞、T-98G细胞、FLS细胞

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BEL 7402细胞类似产品：：HTR-8/SVneo细胞、SW403细胞、NT-2细胞

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