SK-N-SH Cells(赠送Str鉴定报告)|人神经母细胞瘤细胞

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细胞背景资料：SK-N-SH细胞系由J.L.Bieder建系，它与SK-N-MC所不同的是倍增时间较长且多巴胺-β-羟基酶水平较高。 SK-N-SH在细胞介导的细胞毒性试验中用作靶细胞系。

细胞形态：上皮细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：贴壁

Hs840T细胞类似产品：：BTI-Tn5B14细胞、NCI H548细胞、HT-55细胞

DV90细胞类似产品：：SRA01/04 (HLE)细胞、RenCa细胞、373 MG细胞

H-446细胞类似产品：：U251-MG细胞、Hs 888.T细胞、A9(Hamprecht)细胞

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C3H/10T1/2细胞类似产品：：JIMT-1细胞、SF763细胞、RTMC细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

预防细胞污染的注意事项：实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖。CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

细胞传代方法：１：２传代

IALM细胞类似产品：：DMS273细胞、COS7细胞、C28/I2细胞

NCI-H2170细胞类似产品：：Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞、BHT101细胞、COLO-824细胞

HT1080细胞类似产品：：PK-13细胞、PANC.1细胞、OS-732细胞

NCI-H2170细胞类似产品：：Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞、BHT101细胞、COLO-824细胞

WEHI3细胞类似产品：：Hs294T细胞、RPMI-7951细胞、SGC7901/DDP细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：悬浮生长

Hs 675.T细胞类似产品：：PanC1细胞、KYSE-270细胞、NHEK细胞

COLO-824细胞类似产品：：Med 341细胞、Rat Skin 1细胞、M1细胞

H1993细胞类似产品：：Calu-1细胞、U20-S细胞、Centre Antoine Lacassagne-39细胞

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H19-7细胞类似产品：：GM07404细胞、OCI AML2细胞、SCL-II细胞

HuP-T4细胞类似产品：：LAN-6细胞、OCI/AML-2细胞、EL4细胞

常见细胞培养中一些问题总结：１)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为５%-１５%，不要低于５%或GAO过２０%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过GAO则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为１０%，可以适量加减；２)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；３)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；４)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；５)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；６)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

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Tu-212细胞类似产品：：SNU-475细胞、NCI-H526细胞、V79-4细胞

DMS 53细胞类似产品：：CCRF-CEM C7细胞、VB细胞、Eca 109细胞

SF-295细胞类似产品：：HSMC细胞、SUM-149PT细胞、Ly8细胞

NCIH378细胞类似产品：：COLO320-DM细胞、COS-7细胞、EC9706细胞

BC-025细胞类似产品：：Ramos G6.C10细胞、Human Microglia Clone 3细胞、NCI-H748细胞

Kit 225 K6细胞类似产品：：H-1385细胞、251 MG细胞、VMM5细胞

C918细胞类似产品：：BNL CL.2细胞、HCT-15细胞、MDA435细胞

624 MEL细胞类似产品：：SNUC1细胞、CCD-841CoN细胞、COLO-684细胞

PT67细胞类似产品：：CWR22Rv1细胞、OCILY3细胞、CCD841CoN细胞

HNE-2细胞类似产品：：KOPN-8细胞、CL1.0细胞、Hepa 1-6细胞

TE671细胞类似产品：：AU-Mel细胞、SK.MEL.28细胞、Y3.AG.1.2.3细胞

SKCO 1细胞类似产品：：TE32细胞、JJN3细胞、MDA-MB 231细胞

KP4细胞类似产品：：NS653细胞、OC 316细胞、Hs-578Bst细胞

Panc 1细胞类似产品：：PA317细胞、NFHIOSE-80细胞、RCC10RGB细胞

Mv1Lu细胞类似产品：：P3X63-Ag8.653细胞、UPCI:SCC90细胞、HcerEpic细胞

293GP细胞类似产品：：NCIH1963细胞、MIA-PaCa-2细胞、CHP126细胞

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