新型乳剂(佐剂)

一、原理

是一种具有自主知识产权、独特配方的新型油包

，用于免疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、

。该佐剂以

为基础，添加了多种具有强免疫刺激活性的TLR配体。

与常规使用的弗氏佐剂相比，具有以下优点：

（1）

活性强于弗氏不完全佐剂；

（2）与

不同，不含有干扰免疫应答的无关蛋白成分；

（3）安全性好，副反应率低；

（4）免疫针次少、抗原用量低等多方面优点。

二、使用方法     

1.  用生理盐水将抗原稀释到

倍最终浓度（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。

2.  用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl）与抗原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与抗原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。

3.  通过皮下或肌肉单点注射免疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。

（1）佐剂与抗原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；

（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；

（3）尽量选择引流淋巴结附近（如腋窝和腹股沟附近）的皮下或肌肉进行免疫。

4.  第21天按同样方式加强免疫1针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

5.  第35天采微量血进行

，

应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。

6.  若抗体滴度没有达到要求，可在第42天按同样方式加强免疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免疫2针，而家兔往往需要免疫3针。

7.  若免疫3针，可在第52-56天采微量血进行ELISA测定，

应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。备注：佐剂免疫效果有时也与抗原特性有关，若免疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免疫。