荧光染料的优点:
使用简便;
可以与任何PCR产物结合;
价格便宜;
荧光染料的缺点:
不能区分不同的双链DNA
引物二聚体会影响检测的敏感性
非特异性产物会影响结果的敏感性
引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别,进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。
总的来说,SYBR Green I方法是一种最基础也最常用的Real-time qPCR实验手段。
产品名称 | 通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
英文名称 | Trichostrongylus spp. |
货号 | XGR97338 |
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括绝对定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株 Human硫酸妥布霉素Tobramycin Sulfate质量规格:含量634μg/mg-739μg/mg,BR
PLA2G1B Others Human 人 PLA2G1B / PLA2 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸妥布霉素(标准品)Tobramycin Sulfate质量规格:效价测定
人小胶质细胞RNAHM miRNA5 μg托萘酯Tolnaftate质量规格:>98%,USP30,BR
CFD Others Human 人 CFD / Adipsin 人细胞裂解液 (阳性对照) 拓扑替康盐酸盐Topotecan HCl质量规格:>99.0%
SGC-7901 人胃癌细胞拓扑替康盐酸盐(标准品)Topotecan HCl质量规格:HPLC>98%,标准品
CXCL16 Protein Canine 重组狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 标签)盐酸溴己新质量规格:度>99%Bromhexine HCl
MSTO-211H(人肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸布比卡因质量规格:>95%,USPBupivacaine HCl
大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106盐酸依匹斯汀质量规格:>98%,BREpinastine HCl
EPHB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸依匹斯汀(标准品)质量规格:>99%,标准品Epinastine HCl
腹膜内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)依普利酮质量规格:>99%,BR,可用于细胞培养Eplerenone
HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系硫化锌(>98%, Ind Grade)质量规格:>98%, Ind GradeZinc sulfide
通用探针法荧光定量PCR试剂盒CEM细胞,白血病细胞 人前列腺癌细胞,PC-3M细胞 人肝内胆管上皮细胞总RNAHIBEpiC NA氧化锆(>98%,BC)质量规格:>98%,BCZirconium (IV) oxide
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2氯氧化锆八水(>98%,BC)质量规格:>98%,BCZirconium (IV) oxide chloride octahydrate
AHSG Others Human 人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 人细胞裂解液 (阳性对照) 氢氧化锆质量规格:BRZirconium hydroxide hydrate
小鼠周神经成纤维细胞MPNF1酸三戊酯(>98.0%(GC))质量规格:>98.0%(GC)Triamyl Phosphate
人绒毛间充质成纤维细胞 HumanBismuth铋粉25克TLC
EFNB1 Others Mouse 小鼠 EFNB1 / Ephrin-B1 人细胞裂解液 (阳性对照) 头孢涤泥相关物质A Cqfdinir Rqlctqd CoMpound c;2(R)-2-[(Z)-2-(2-cMinothiczol-4-yl)-2-(xy7noxyiMino)ccqtcMido]-2-[(2RS,5RS)-5-Mqthyl-7-oxo-2,4,5,7-tqtrcxy7no-1H-furo[3,4-d][1,3]thiczin-2-yl]ccqtic ccid 1784-4-9
人肝细胞cDNAHH cDNATMD-10溴化四乙500毫升AR,99.8%
CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人细胞裂解液 (阳性对照) GENEPAGEPLUS5.5%EZSQZ.*CLDPAK5.5% GENE-PAGE PLUS,挤压式瓶装生物技术级10X75MLCOLD
大鼠肝细胞瘤;H-4-II-E(腺苷-5'-二1酸腺苷)
荧光化学物质:
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:
1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。
2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。