小鼠冠状动脉内皮细胞提取物图片

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
以下是小鼠冠状动脉内皮细胞提取物图片的订购信息：

小鼠冠状动脉内皮细胞提取物是从小鼠原代冠状动脉内皮细胞提取的，小鼠原代冠状动脉内皮细胞从正常小鼠动脉组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备小鼠冠状动脉内皮组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
溴代异丁烷Human PRR4(Proline Rich Protein 4, Lacrimal) ELISA Kit

淫羊藿苷Human PRSS23(Protease, Serine 23) ELISA Kit

3-碘-4-氨基吡啶Human PRSS33(Protease, Serine 33) ELISA Kit

3-碘-4-氨基吡啶Human PSAP(Prosaposin) ELISA Kit

乙酸异丙酯Human PSPN(Persephin) ELISA Kit

异甘草素Human PTD(Pentosidine) ELISA Kit

焦磷酸铁(III)Human PTF1α(Pancreas Specific Transcription Factor 1α) ELISA Kit

焦磷酸铁(III)Human PTGIS(Prostaglandin I Synthase) ELISA Kit

靛蓝Human PTP1B(protein tyrosine phosphatase 1B) ELISA Kit

靛蓝Human PTPN14(protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 14) ELISA Kit

衣康酸Human PTPRJ(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type J) ELISA Kit

异戊烷Human PTPRN(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit

4-碘四氢-2H-吡喃Human PYGL(Glycogen Phosphorylase, Liver) ELISA Kit

4-碘四氢-2H-吡喃Human PYGM(Glycogen Phosphorylase, Muscle) ELISA Kit

棕榈酸异丙酯Human Rac-GAP1(Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit
小鼠冠状动脉内皮细胞提取物图片麦康凯肉汤MacConkey Broth克螨特 分析标准品，91%Concanavalin A

伊红美蓝琼脂培养基Levine Eosin-Methylene Blue-Agar Medium克螨特标准溶液 100μg/ml,u=3%Immunoglobulin A

Baird-Parker 琼脂培养基基础Baird-Parker Agar Medium Base克螨特标准溶液 10μg/ml,u=4%low molecular weight heparin

亚碲酸钾卵黄增菌液磷胺标准溶液 100μg/ml,u=4%（剧毒品）Low Density Lipoprotein

Vogel-Johnson 琼脂基础Vogel-Johnson Agar Medium Base磷胺标准溶液 10μg/ml,u=6%（剧毒品）low-density-lipoprotein cholesterol

1%亚碲酸钾溶液1%sterile potassium tellurite solution哌草磷 分析标准品，93%Low Density Lipoprotein Receptor

亚硒酸盐胱氨酸培养基Fluid Selenite-Cystine Medium三氯杀虫酯标准溶液10μg/ml,u=2%,溶剂:异丙醇low-density lipoprotein-receptor-related protein 1

梭菌增菌培养基Reinforced Medium for Clostridia三氯杀虫酯标准溶液100μg/ml,u=2%,溶剂:异丙醇low-density lipoprotein-receptor-related protein 4

哥伦比亚琼脂基础Columbia Agar Base异丙草胺 分析标准品，94%low-density lipoprotein-receptor-related protein 5

硫酸庆大霉素Gentamicin sulfate甲基嘧啶磷 100μg/ml,u=2%low-density lipoprotein-receptor-related protein 6

RV 沙氏增菌肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella EnrichmentBroth甲基嘧啶磷 10μg/ml,u=3%hypoxia-inducible factor 1α

甘油霜霉威 分析标准品，99%hypoxia-inducible factor 2α

溴十六烷三甲铵琼脂基础Cetrimide Agar Base五氯硝基苯标准溶液 100μg/ml,u=2%Resistin
实验报告：
一分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。