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人脑膜细胞提取物说明书

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上海 更新日期:2022-08-19

上海抚生实业有限公司

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人脑膜细胞提取物说明书
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产品类别:
细胞培养 细胞、组织提取物

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人脑膜细胞提取物说明书

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FSX6713

人脑膜细胞分离自正常人脑膜组织,主要功能:(1)脑膜细胞围绕着大脑,参与中枢神经系统的正常发育。(2)细胞能稳定脑软膜表面的细胞外基质、组织放射状胶质细胞网络和小脑皮层分层结构。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。

蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人脑膜组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。

潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
实验报告:
一分离与培养:
    1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
    3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
    5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
    2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
    3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
    5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
    6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
Fmoc-β-(3-吡啶基)-D-Ala-OHHuman APOM(Apolipoprotein M) ELISA Kit

黄腐酸Human APOD(Apolipoprotein D) ELISA Kit

黄腐酸Human CXCR4(C-X-C chemokine receptor type 4) ELISA Kit

呋喃唑酮Human AMY2(Amylase Alpha 2, Pancreatic) ELISA Kit

呋喃唑酮Human DDAH2(N(G),N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2) ELISA Kit

3-氟吡啶-2-甲酸Human HIG2(Hypoxia-inducible gene 2 protein) ELISA Kit

3-氟吡啶-2-甲酸Human NES(Nestin) ELISA Kit

2-乙酰呋喃Human SYP(Synaptophysin) ELISA Kit

2-乙酰呋喃Human BST1(ADP-ribosyl cyclase 2) ELISA Kit

3-氟-2-硝基吡啶Human PIICP(C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(II)chain) ELISA Kit

3-氟-2-硝基吡啶Human PIINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(II)chain) ELISA Kit

佛司可林Human DCP(Des-gamma carboxyprothrombin) ELISA Kit

4-氟-2,6-二甲基苯酚Human WNT3A(Protein Wnt-3a) ELISA Kit

4-氟-2,6-二甲基苯酚Human SMAD2(Mothers against decapentaplegic homolog 2) ELISA Kit

阿魏酸乙酯Human Smad3/MADH3(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 3) ELISA Kit
人脑膜细胞提取物说明书 绿茶提取物N-CBZ-羟脯氨酸甲酯 95%THP ELISA Kit

 五味子提取物3-羟基-9H-占吨-9-酮 98%TIEG1 ELISA Kit

 百部提取物L-亮氨醇 96%Tau proteins ELISA kit

 葡萄籽提取物2-甲基-6-硝基苯甲酸 98%TARDBP ELISA Kit

 桔梗提取物 5-甲氧基-2-硝基苯甲酸 97%S-adenosylhomocysteine,SAH ELISA kit

 大黄提取物 L-苯丙氨酸叔丁酯盐酸盐 99%SDC3 ELISA Kit

 骨碎补提取物N-叔丁氧羰基肌氨酸 98%SDC1 ELISA Kit

 苦木提取物D-泛酸钙 药用级SMARCC1 ELISA Kit

 银杏叶提取物亚硫酸氢钠甲萘醌 分析标准品Steap4 ELISA Kit

 环己甲醛亚硫酸氢钠甲萘醌 95%Steap1 ELISA Kit

 1,6-己二醛烟酰胺 99%STMN1 ELISA Kit

 苄基氯化镁四氯苯醌 98%PIAS3 ELISA Kit

 苯基溴化镁四螨嗪 分析标准品,98.6%Spondin-2 ELISA Kit

 

 
 
人脑膜细胞提取物;FSX6713;

公司简介

上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。 上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。 公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务! 公司售后服务宗旨:有质量问题可申请退换,有技术疑问可随时给于解答,一对一的客服服务,客户的需求也是我们不断的更新服务。

成立日期 (13年)
注册资本 550
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 贸易,工厂,试剂
主营行业 生化试剂,抗体,细胞培养,分子生物学,细胞生物学

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