大鼠表皮黑色素细胞培养

细胞冻存：
对培养的细胞进行冻存的方法是将细胞置于含有(DMSO)等冷冻保护剂的完全培养基中于液氮中储存。冷冻保护剂可降低培养基的冰点，并可减缓冷却速度吗，大大降低冰晶形成的危险  (冰晶可损伤细胞，导致细胞死亡)。
注：DMSO 可促进有机分子进入组织。操作含DMSO的试剂时，应采用与此类物质安全危害相适应的设备和操作规范，并应按照当地法规处置此类试剂。 
细胞冻存指导原则
冻存细胞系以备将来之用时，必须遵守以下原则。与其他细胞培养操作一样，我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明，以便获得结果。 
1）在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意冻存条件取决于所用细胞系。 
2）细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。
3）必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂
4）将冷冻的细胞于 -70°C 以下温度储存；温度高于 -50°C 时，冷冻的细胞将开始变质。 
5）必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存 
6）必须穿戴个人防护设备。 
7）所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内进行。
       产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据国际标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右完全培养基；2、说明书及注意事项；3、公司售后服务标准。

      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线

2,5-二溴-3-甲基吡啶Human APOH(Beta-2-glycoprotein 1) ELISA Kit

2,5-二溴-3-甲基吡啶Human AKT1(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase) ELISA Kit

亚磷酸二甲酯Human FST(Follistatin) ELISA Kit

亚磷酸二甲酯Human INHA(Inhibin alpha chain) ELISA Kit

D-丝氨酸Human PDGFC(Platelet-derived growth factor C) ELISA Kit

D-丝氨酸Human SERPINE1(Plasminogen activator inhibitor 1) ELISA Kit

D-丝氨酸Human COL15A1(Collagen alpha-1 XV) ELISA Kit

2,4-二氯氯苄Human FGF2(Heparin-binding growth factor 2) ELISA Kit

2,4-二氯氯苄Human TNNI2(Troponin I, fast skeletal muscle) ELISA Kit

4,4-二氟环己酮Human S100B(Protein S100-B) ELISA Kit

4,4-二氟环己酮Human CYCS(Cytochrome c) ELISA Kit

D-亮氨酸Human APOA1(Apolipoprotein A-I) ELISA Kit

D-亮氨酸Human CASP3(Caspase-3) ELISA Kit

D-亮氨酸Human NOS1/nNOS(Nitric oxide synthase, brain) ELISA Kit

富马酸二甲酯Human PDGFB(Platelet-derived growth factor subunit B) ELISA Kit
大鼠表皮黑色素细胞培养AT- III ELISA Kit  大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体三氟甲氧基苯基异氰酸酯 98%Profilin 1 ELISA Kit

AT- III (Mouse Anti-Thrombin III )ELISA Kit  小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体异氰尿酸三缩水甘油酯 98%Pro-Hepcidin,Pro-Hepc ELISA Kit

AT II R1(Human angiotension II receptor 1 Antibody) ELISA Kit  人血管紧张素Ⅱ受体1抗体对甲苯异氰酸酯 98%Prostatic Acid Phosphatase,PAP ELISA Kit

AT ELISA Kit  大鼠抗胰蛋白酶环己烷羧酸 99%Prostaglandin H2,PGH2 ELISA Kit

AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit  人天门冬氨酸氨基转移酶环己烷羧酸 ≥98%, KosherProstaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit

ASP(Human antibody to group A streptococcal polysaccharide) ELISA Kit  人A组链球菌菌壁多糖抗体糠酸 98%Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit

ASO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit  人抗链球菌溶血素O/抗O4-叔丁基环己醇 98%Prostaglandin E2,PGE2 ELISA Kit

ASMA(Mouse Anti-Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit  小鼠抗平滑肌抗体仲辛醇 ≥99% (GC)Prostaglandin E1,PGE1 ELISA Kit

ASMA(Human Anti-smooth muscle antibody) ELISA Kit  人抗平滑肌抗体癸二酸 CP,98.0%Prostaglandin D Synthase,PGDS ELISA Kit

ASMA ELISA Kit  大鼠抗平滑肌抗体癸二酸 99%Prostaglandin D2,PGD2 ELISA kit

ASM(Human acid sphingomyelinase) ELISA Kit  人酸性神经鞘磷脂酶癸二酸 色谱固定液，155℃Prostaglandin A1,PGA1 ELISA Kit

ASK-1(Human apoptosis signal regulating kinase 1) ELISA Kit  人凋亡信号调节激酶I氢氧化铯,一水 99.9% metals basisprostacycline,PGI2 ELISA Kit

ASGPR(Human asialoglyco protein receptor) ELISA Kit  人去唾液酸糖蛋白受体塑料盖和垫片,匹配20L铝桶,φ99.4*32progranulin,PGRN ELISA Kit
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。