PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:兔黏液瘤病毒(RMV)核酸定量试剂盒
英文名称:详见说明书
编号: FSP2913
分类:核酸检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human FOLR2(Folate receptor beta) ELISA KitHorse ADP(Adiponectin) ELISA Kit鼠李糖 组蛋白H4-K12乙酰化检测试剂盒
Human B4GALT5(Beta-1,4-galactosyltransferase 5) ELISA KitHorse PAI2(Plasminogen Activator Inhibitor 2) ELISA Kit鼠李糖 组蛋白H4-K16乙酰化检测试剂盒
Human CAMKK2(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2) ELISA KitHorse IL-4(Interleukin 4) ELISA KitL-鼠李糖 组蛋白H2B-K46甲基化(di)检测试剂盒
Human CBLB(E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B) ELISA KitHorse FSH(Follicle Stimulating Hormone) ELISA KitL-肌肽 组蛋白H3-K4(mono/di/tri)甲基化检测试剂盒
Human CD5L(CD5 antigen-like) ELISA KitHorse LH(Luteinizing Hormone) ELISA KitL-肌肽 组蛋白H3-K9(mono/di/tri)甲基化检测试剂盒
Human FAM3B(Protein FAM3B) ELISA KitHorse IgG(Immunoglobulin G) ELISA KitL-脯氨酸甲酯盐酸盐 组蛋白H3-K18(mono)甲基化检测试剂盒
Human MYOF(Myoferlin) ELISA KitHorse TF(Tissue Factor) ELISA KitL-脯氨酸甲酯盐酸盐 组蛋白H3-K23甲基化(mono/di)检测试剂盒
Human GFRA1(GDNF family receptor alpha-1) ELISA KitHorse ANX5(Annexin 5) ELISA Kit4-异丙基甲苯 组蛋白H3-K27(mono/di/tri)甲基化检测试剂盒
兔黏液瘤病毒(RMV)核酸定量试剂盒DiSBAC2(3) 20mg 101509-27-7Rat Neuron-specific enolase, NSE Elisa KitHPLC95%DiSBAC2(3) 20mgFXIIa进口、国产用于空肠弯曲菌的分离培养英文名称:50mg重组人 PRTFDC1 蛋白 (His 标签)特价促销1041631-93-996T核因子κB受体激活因子配基(RANκL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%DiSBAC2(3) 20mgFXIIa32042-43-6高端化学试剂Human Cyclin-D2 Elisa Kit进口、国产弯曲杆菌的抗生素敏感性试验和纯化培养英文名称:Phenoxybenzamine Hydrochloride 250mg重组人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (His 标签)28028-62-896T早期生长应答因子4(EGR4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%Oxonol V 20mgLutein32042-43-6高端化学试剂Human Cyclin-D1 Elisa Kit
Oxonol V 20mg 101-59-7Rat Neuron-specific enolase, NSE Elisa KitHPLC95%Oxonol V 20mgLutein进口、国产弯曲杆菌的抗生素敏感性试验和纯化培养英文名称:Phenoxybenzamine Hydrochloride 250mg重组人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (His 标签)28028-62-896T早期生长应答因子4(EGR4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%Oxonol V 20mgLutein32042-43-6高端化学试剂Human Cyclin-D1 Elisa Kit进口、国产用于弯曲杆菌增菌肉汤和布氏琼脂的制备英文名称:L-Phenylalanine 200mg重组人 BPHL 蛋白 (His 标签)特价供应1221762-70-496T葡萄糖6酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%Oxonol VI 20mgGFR32042-43-6高端化学试剂Human Cyclin-D1 Elisa Kit
Oxonol VI 20mg 101-59-7Rat intercellular adhesion molecule 2, ICAM-2 Elisa KitHPLC95%Oxonol VI 20mgGFR进口、国产用于弯曲杆菌增菌肉汤和布氏琼脂的制备英文名称:L-Phenylalanine 200mg重组人 BPHL 蛋白 (His 标签)特价供应1221762-70-496T葡萄糖6酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%Oxonol VI 20mgGFR32042-43-6高端化学试剂Human Cyclin-D1 Elisa Kit进口、国产用于分离真菌,酵母菌等英文名称:Meclofenamate Sodium500mg重组人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 蛋白 (His 标签)现货促销376361-87-496T葡萄糖6酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%RH 23720mgRRM24320-30-3高端化学试剂Human Endostatin, ES Elisa Kit
RH 23720mg 1016-05-3Rat intercellular adhesion molecule 2, ICAM-2 Elisa KitHPLC95%RH 23720mgRRM2进口、国产用于分离真菌,酵母菌等英文名称:Meclofenamate Sodium500mg重组人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 蛋白 (His 标签)现货促销376361-87-496T葡萄糖6酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%RH 23720mgRRM24320-30-3高端化学试剂Human Endostatin, ES Elisa Kit 进口、国产弯曲杆菌的TTC试验英文名称:Edetate Disodium200mg重组人 Pepsinogen C / PGC 蛋白 (His 标签)特价促销537-41-796T谷氨酸脱羧酶2(GAD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%RH 42120mgZnT-84320-30-3高端化学试剂Human Endostatin, ES Elisa Kit
RH 42120mg 1016-05-3Rat intercellular adhesion molecule 3, ICAM-3 Elisa KitHPLC95%RH 42120mgZnT-8进口、国产弯曲杆菌的TTC试验英文名称:Edetate Disodium200mg重组人 Pepsinogen C / PGC 蛋白 (His 标签)特价促销537-41-796T谷氨酸脱羧酶2(GAD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%RH 42120mgZnT-84320-30-3高端化学试剂Human Endostatin, ES Elisa Kit 进口、国产用于细菌总数测定时防止菌落蔓延英文名称:Saccharin Calcium100mg重组人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 蛋白 (aa 200-503, His & GST 标签)1146113-27-096T谷氨酸脱羧酶2(GAD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 1-43 20mgRA33IgG Ab36589-29-4高端化学试剂Human ferritin, FE Elisa Kit
MM 1-43 20mg 101711-78-8Rat intercellular adhesion molecule 3, ICAM-3 Elisa KitHPLC95%MM 1-43 20mgRA33IgG Ab进口、国产用于细菌总数测定时防止菌落蔓延英文名称:Saccharin Calcium100mg重组人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 蛋白 (aa 200-503, His & GST 标签)1146113-27-096T谷氨酸脱羧酶2(GAD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 1-43 20mgRA33IgG Ab36589-29-4高端化学试剂Human ferritin, FE Elisa Kit进口、国产用于化妆品中细菌总数测定英文名称:2g重组人 Ubiquitin specific peptidase 30 / USP30 蛋白 (SUMO 标签)特价供应56317-21-696T山梨醇脱氢酶(SDH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%RH 414 20mgCasp-1036589-29-4高端化学试剂Human ferritin, FE Elisa Kit
RH 414 20mg 10177-29-4Rat plasminogen activator inhibitor 1, PAI-1 Elisa Kit HPLC95%RH 414 20mgCasp-10进口、国产用于化妆品中细菌总数测定英文名称:2g重组人 Ubiquitin specific peptidase 30 / USP30 蛋白 (SUMO 标签)特价供应56317-21-696T山梨醇脱氢酶(SDH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%RH 414 20mgCasp-1036589-29-4高端化学试剂Human ferritin, FE Elisa Kit进口、国产化妆品微生物检测英文名称:Pramoxine Hydrochloride500mg重组人 RRM1 蛋白 (His & GST 标签)现货促销90-19-796T氧还蛋白结合蛋白2(TBP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 4-6420mgMMP-93230-94-2高端化学试剂Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit
MM 4-6420mg 10177-29-4Rat plasminogen activator inhibitor 1, PAI-1 Elisa Kit HPLC95%MM 4-6420mgMMP-9进口、国产化妆品微生物检测英文名称:Pramoxine Hydrochloride500mg重组人 RRM1 蛋白 (His & GST 标签)现货促销90-19-796T氧还蛋白结合蛋白2(TBP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 4-6420mgMMP-93230-94-2高端化学试剂Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit进口、国产弯曲杆菌甘氨酸耐受性试验英文名称:Sulfanilamide 5g重组人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 标签)特价促销76235-93-396T细胞色素P450家族成员7A1(CYP7A1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 2-1020mgCA3230-94-2高端化学试剂Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit
MM 2-1020mg 101-86-0Rat plasminogen activator inhibitor, PAI Elisa Kit HPLC95%MM 2-1020mgCA进口、国产弯曲杆菌甘氨酸耐受性试验英文名称:Sulfanilamide 5g重组人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 标签)特价促销76235-93-396T细胞色素P450家族成员7A1(CYP7A1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 2-1020mgCA3230-94-2高端化学试剂Human microtransferrinuria, MTF Elisa Kit进口、国产弯曲杆菌的化氢试验英文名称:500mg重组人 PPIL1 蛋白 (His 标签)517-66-896T血红素结合蛋白(HPX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 5-9520mgSDS32443-99-5高端化学试剂Human tissue inhibitor of metal protease 1, TIMP-1 Elisa Kit
MM 5-9520mg 101-86-0Rat plasminogen activator inhibitor, PAI Elisa Kit HPLC95%MM 5-9520mgSDS进口、国产弯曲杆菌的化氢试验英文名称:500mg重组人 PPIL1 蛋白 (His 标签)517-66-896T血红素结合蛋白(HPX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%MM 5-9520mgSDS32443-99-5高端化学试剂Human tissue inhibitor of metal protease 1, TIMP-1 Elisa Kit进口、国产用于细菌的DNA酶水解试验英文名称:Clofibrate1g重组人 LILRB2 / ILT4 / LIR-2 蛋白 (His 标签)特价供应41787-57-996T谷丙转氨酶(ALT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%TMA-DPH20mgAAN-A5 Ab32443-99-5高端化学试剂Human tissue inhibitor of metal protease 1, TIMP-1 Elisa Kit
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。