PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称：副猪嗜血杆菌(HPS)核酸
英文名称：详见说明书
编号： FSP2869
分类：核酸检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human CCL3L1(Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1) ELISA KitHuman KYN(Kynurenine) ELISA KitL-脯氨酸粪便DNA分离试剂盒
Human CLL1(Collectin Liver 1) ELISA KitHuman Acetylated p53 ELISA KitL-脯氨酸粪便细胞DNA分离试剂盒
Human CHD5(Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 5) ELISA KitHuman Cleaved CASP9(Cleaved Caspase-9) ELISA KitL-脯氨酸粪便细菌DNA分离试剂盒
Human CK-13/KRT13(CytokeRatin 13) ELISA KitHuman Cleaved CASP8(Cleaved Caspase-8) ELISA KitL-赖氨酸粪便DNA高质纯化试剂盒
Human CGα(Chorionic Gonadotropin Alpha Polypeptide) ELISA KitHuman Cleaved BID/TBID(Cleaved BH3-interacting domain death agonist) ELISA KitL-赖氨酸粪便DNA分离＋高质纯化试剂盒
Human CHGB(Chromogranin B) ELISA KitHuman CD281/TLR1(Toll-like receptor 1) ELISA KitL-赖氨酸石蜡切片DNA分离试剂盒
Human CHRM2(Cholinergic Receptor, Muscarinic 2) ELISA KitHuman Bcl2L2(Bcl-2 Like Protein 2) ELISA KitL-精氨酸石蜡切片DNA高质纯化试剂盒
Human CK-20/KRT20(CytokeRatin 20) ELISA KitHuman HSP72(Heat Shock Protein 72) ELISA KitL-精氨酸石蜡切片DNA分离＋高质纯化试剂盒
副猪嗜血杆菌(HPS)核酸牛蒡子苷元6-TAMRA CPG *500 Å*5mg 1008-72-6Rat annexin Ⅴ, ANX-Ⅴ Elisa KitHPLC98%6-TAMRA CPG *500 Å*5mgArg进口、国产250英文名称：Emedastine Difumarate100mg重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白 (His 标签)特价促销195723-38-796T促甲状腺素(TSH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-TAMRA CPG *500 Å*5mgArg72-19-5高端化学试剂Human connective tissue growth factor, CTGF Elisa Kit进口、国产1ml*10支英文名称：10mg重组人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 标签)474893-07-796T促甲状腺素(TSH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-TAMRA CPG *1000 Å*5mgTR72-19-5高端化学试剂Human Interleukin 18, IL-18 Elisa Kit
6-TAMRA CPG *1000 Å*5mg 1008-72-6Rat annexin Ⅴ, ANX-Ⅴ Elisa KitHPLC98%6-TAMRA CPG *1000 Å*5mgTR进口、国产1ml*10支英文名称：10mg重组人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 标签)474893-07-796T促甲状腺素(TSH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-TAMRA CPG *1000 Å*5mgTR72-19-5高端化学试剂Human Interleukin 18, IL-18 Elisa Kit 进口、国产250英文名称：5mg重组人 ENPEP / Aminopeptidase A 蛋白 (His 标签)特价供应195735-16-196T抗精子抗体(AsAb)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-TAMRA 亚酰胺5mgTPI632-20-2高端化学试剂Human Interleukin 18, IL-18 Elisa Kit
6-TAMRA 亚酰胺5mg 1008-88-4Rat anti-endothelial cell antibody, AECA Elisa KitHPLC98%6-TAMRA 亚酰胺5mgTPI进口、国产250英文名称：5mg重组人 ENPEP / Aminopeptidase A 蛋白 (His 标签)特价供应195735-16-196T抗精子抗体(AsAb)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%6-TAMRA 亚酰胺5mgTPI632-20-2高端化学试剂Human Interleukin 18, IL-18 Elisa Kit 进口、国产250英文名称：25mg重组人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 标签)现货促销51828-10-596T抗子宫内膜抗体(Anti-EMAb)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%BHQ-1 CPG *500 Å*5mgNURR1632-20-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit
BHQ-1 CPG *500 Å*5mg 1008-88-4Rat anti-endothelial cell antibody, AECA Elisa KitHPLC98%BHQ-1 CPG *500 Å*5mgNURR1进口、国产250英文名称：25mg重组人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 标签)现货促销51828-10-596T抗子宫内膜抗体(Anti-EMAb)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%BHQ-1 CPG *500 Å*5mgNURR1632-20-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit进口、国产250英文名称：Amiodarone Related Compound H20mg重组人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 标签)特价促销2749-28-296T脂联素(ADP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%BHQ-1 CPG *1000 Å*5mgPAIT1632-20-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit
BHQ-1 CPG *1000 Å*5mg 1008-89-5Rat intact Parathormone , i-PTH Elisa Kit HPLC98%BHQ-1 CPG *1000 Å*5mgPAIT1进口、国产250英文名称：Amiodarone Related Compound H20mg重组人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 标签)特价促销2749-28-296T脂联素(ADP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%BHQ-1 CPG *1000 Å*5mgPAIT1632-20-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit进口、国产250英文名称：Potassium Bitartrate (AS)3g重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 标签)5631-68-596T肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%对硝基苯酸二钠盐5mgMDH632-20-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit
对硝基苯酸二钠盐5mg 1008-89-5Rat intact Parathormone , i-PTH Elisa Kit HPLC98%对硝基苯酸二钠盐5mgMDH进口、国产250英文名称：Potassium Bitartrate (AS)3g重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 标签)5631-68-596T肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%对硝基苯酸二钠盐5mgMDH632-20-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit进口、国产250英文名称：Sodium Lactate 200mg重组人 KIAA1279 蛋白特价供应60125-23-796T表面活性物质关联蛋白A(SPA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%对硝基苯酸二钠盐5mgβ Manase80-68-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit
对硝基苯酸二钠盐5mg 1008-89-5Rat Calf Intestine Alkaline Phosphatase, CIAP Elisa KitHPLC98%对硝基苯酸二钠盐5mgβ Manase进口、国产250英文名称：Sodium Lactate 200mg重组人 KIAA1279 蛋白特价供应60125-23-796T表面活性物质关联蛋白A(SPA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%对硝基苯酸二钠盐5mgβ Manase80-68-2高端化学试剂Human mucosae associated epithelia chemokine, MEC Elisa Kit进口、国产250英文名称：Carprofen Related Compound A50mg重组人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 标签)现货促销10210-17-096T转化生长因子β1(TGFβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%萤火虫荧光素酶5mgβ Manase80-68-2高端化学试剂Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor, BAFF-R Elisa Kit
东北贯众素萤火虫荧光素酶5mg 1009-36-5Rat Calf Intestine Alkaline Phosphatase, CIAP Elisa KitHPLC98%萤火虫荧光素酶5mgβ Manase进口、国产250英文名称：Carprofen Related Compound A50mg重组人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 标签)现货促销10210-17-096T转化生长因子β1(TGFβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%萤火虫荧光素酶5mgβ Manase80-68-2高端化学试剂Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor, BAFF-R Elisa Kit进口、国产250英文名称：10mg重组人 Annexin A8 / ANXA8 蛋白 (His 标签)特价促销24513-51-796T组胺(HIS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgPIGR80-68-2高端化学试剂Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor, BAFF-R Elisa Kit
D-虫荧光素游离酸5mg 1009-36-5associated protein A, SP-A Elisa KitHPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgPIGR进口、国产250英文名称：10mg重组人 Annexin A8 / ANXA8 蛋白 (His 标签)特价促销24513-51-796T组胺(HIS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgPIGR80-68-2高端化学试剂Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor, BAFF-R Elisa Kit进口、国产250英文名称：50mg重组人 ADPRH / ARH1 蛋白 (His 标签)263844-79-796T内皮素1(EDN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgNetrin-480-68-2高端化学试剂Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2, VEGFR-2/Flk-1 Elisa Kit
D-虫荧光素游离酸5mg 1009-36-5associated protein A, SP-A Elisa KitHPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgNetrin-4进口、国产250英文名称：50mg重组人 ADPRH / ARH1 蛋白 (His 标签)263844-79-796T内皮素1(EDN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgNetrin-480-68-2高端化学试剂Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2, VEGFR-2/Flk-1 Elisa Kit 进口、国产250英文名称：50mg重组人 DCUN1D2 蛋白 (His 标签)特价供应17245-30-696T维生素D2(VD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%D-虫荧光素游离酸5mgAPCA2592-18-9高端化学试剂Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2, VEGFR-2/Flk-1 Elisa Kit
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
