PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称：类鼻疽伯克霍尔德菌PCR试剂盒
英文名称：详见说明书
编号： FSP2566
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human MAP7 ELISA KitHuman LPAR4(Lysophosphatidic acid receptor 4) ELISA Kit双(叔丁氧羰基)胺HBL-100
Human MAPK12 ELISA KitHuman Smad1/MADH1(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1) ELISA Kit双(叔丁氧羰基)胺TT
Human MAPK4 ELISA KitHuman Smad7/MADH7(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7) ELISA Kit1,3-dicyclohexyl-1H-imidazol-3-ium tetrafluoroborateCCD-1095Sk
Human MAPK13 ELISA KitHuman TNFAIP6(Tumor necrosis factor-inducible gene 6 protein) ELISA Kit1,3-dicyclohexyl-1H-imidazol-3-ium tetrafluoroborateHs68
Human MAPK7 ELISA KitHuman AOC1(Amiloride-sensitive amine oxidase [copper-containing]) ELISA Kit1,3-dicyclohexyl-1H-imidazol-3-ium tetrafluoroborateHFF
Human MAPK6 ELISA KitHuman MAOA(Amine oxidase [flavin-containing] A) ELISA Kit1,3-dicyclohexyl-1H-imidazol-3-ium tetrafluoroborateCaov-3
Human MAPKBP1 ELISA KitHuman CTXI(Cross Linked C-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit1,4-二氧六环A2780
Human Marcks ELISA KitHuman GCK(Glucokinase) ELISA Kit1,4-二氧六环HO-8910
类鼻疽伯克霍尔德菌PCR试剂盒Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-pig IgG/AP 碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗猪IgG 3-羟基异烟酸ABL2ABL2蛋白抗体特价促销
Aciculoconidium aculeatum (Phaff et al.) Ki ..Rabbit Anti-pig IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG 溴化吡斯的明ABI1ABI1/SSH3BP1蛋白抗体特价促销
Neisseria flava Bergey et al.Rabbit Anti-pig IgG/FITC FITC标记的兔抗猪IgG 3-羟基二苯基胺ACADS酰基辅酶A脱氢酶短链抗体特价促销
Bartonella washoensisI/Rabbit Anti-pig IgG/Gold 胶体金标记的兔抗猪IgG 3-甲氧基二苯胺ABP/SHBG雄激素结合蛋白抗体特价促销
Homo sapiens, humanRabbit Anti-pig IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗猪IgG 盐酸米那普仑ACADM/MCAD酰基辅酶A脱氢酶中链抗体特价促销
Curvularia inaequalis (Shear) Boedijn, anam ..Rabbit Anti-pig IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗猪IgG 1-(2-氟苯基)哌嗪ACADL酰基辅酶A脱氢酶长链抗体特价促销
Aspergillus ostianus Wehmer, anamorphRabbit Anti-pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗猪IgG 5-甲基色胺盐酸盐ACADVL酰基辅酶A脱氢酶很长链抗体特价促销
Pseudomonas cichorii (Swingle) StappRabbit Anti-pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗猪IgG N,N-二苄基乙醇胺ACAT1胆固醇酰基转移酶1抗体特价促销
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
