PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:副猪嗜血杆菌定量PCR试剂盒
英文名称:详见说明书
编号: FSP2500
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
兔脑血管周细胞Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit硫酸二甲酯胎盘羊膜细胞
兔内皮祖细胞Human MIA(Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit硫酸二甲酯胎盘滋养层细胞
兔皮肤成纤维细胞Human MK(Midkine) ELISA Kit4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)胎盘绒毛膜细胞
兔脾基质细胞Human MIP-1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit二甲基二烯丙基氯化铵 溶液脐带单核细胞
兔脾源性内皮祖细胞Human MIP-3a/CCL20(Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit1,2-二氯乙烷胎儿表皮角化细胞
兔破骨细胞Human MMP-1(Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit1,2-二氯乙烷胎儿真皮成纤维细胞
兔脐静脉内皮细胞Human MMP-12(Macrophage metalloelastase) ELISA Kit1,2-二氯乙烷脐静脉内皮细胞
兔气管平滑肌细胞Human MMP13(Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit1,2-二氯乙烷脐动脉内皮细胞
副猪嗜血杆菌定量PCR试剂盒Calonectria pyrochroa (Desmazieres) Saccard ..Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的小鼠抗大鼠IgG 草酸铌(V)喹诺酮类(QNS)ELISA快速检测试剂盒(检组织/血清/蜂蜜,灵敏度1ppb,一步法)
Torulaspora delbrueckii (Lindner) LindnerMouse Anti-rat IgG/Gold 胶体金标记的小鼠抗大鼠IgG 2-乙氧基苯硼酸恩诺沙星(ENR)ELISA快速检测试剂盒(检组织/蜂蜜/血清,灵敏度0.25ppb,一步法)
Aspergillus parasiticus Speare, anamorphMouse Anti-rat IgG/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗大鼠IgG 3-氯-2-氟苯胺青霉素G(BP)ELISA快速检测试剂盒(检组织,灵敏度0.1ppb,两步法)
Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) MigulaMouse Anti-rat IgG/FITC FITC标记的小鼠抗大鼠IgG 4-溴-2-氟苯酚泰乐菌素(TYL)ELISA快速检测试剂盒(检肌肉/肝脏/蜂蜜,灵敏度1.5ppb,一步法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Mouse Anti-rat IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的小鼠抗大鼠IgG 2-丙氧基苯甲酸庆大霉素(Gen)ELISA快速检测试剂盒(检组织/肝脏/乳制品,灵敏度0.05ppb,一步法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Mouse Anti-rat IgG/RBITC 罗丹明标记的小鼠抗大鼠IgG 2,4,5-三氟苯乙酸呋喃妥因代谢物(AHD)ELISA检测试剂盒(检肌肉组织/蜂蜜,灵敏度0.04ppb,一步法)
Bacillus subtilis (Ehrenberg) CohnMouse Anti-rat IgG/Bio 生物素标记的小鼠抗大鼠IgG 1-(2-嘧啶基)哌嗪呋喃唑酮代谢物检测试剂盒(检肌肉组织/蜂蜜,灵敏度0.01ppb,一步法)
Homo sapiens, humanMouse Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗大鼠IgG 偶氮二异丙基咪唑啉呋喃西林代谢物(SEM)ELISA检测试剂盒(检肌肉组织/蜂蜜,灵敏度0.02ppb,一步法)
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。