单增李斯特菌prfA基因(bp)常规PCR检测试剂盒

产品名称：单增李斯特菌prfA基因(bp)常规PCR检测试剂盒
英文名称：详见说明书
编号： FSP2462
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、产品仅供科研制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
猪肾细胞系，PK-13细胞anti- XPR1 antibodyD-4-氰基苯丙氨酸小鼠海绵体平滑肌细胞

猪肾细胞，PK-15细胞anti- XRCC2 antibodyD-4-氰基苯丙氨酸小鼠颌下腺上皮细胞

原代细胞anti- XRCC4 antibody1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯小鼠滑膜成纤维细胞

大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞anti- XRCC5/Ku80 antibody1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯小鼠肌卫星细胞

大鼠B淋巴细胞anti- XRN1 antibody2,4-二甲氧基苄胺小鼠脊髓神经元

大鼠DC细胞anti- XRN2 antibody2,4-二甲氧基苄胺小鼠甲状腺成纤维细胞

大鼠NK细胞anti- XRP2 antibody2,4-二溴苯胺小鼠甲状腺上皮细胞

大鼠T淋巴细胞anti- XYLT1 antibody2,4-二溴苯胺小鼠角膜基质细胞
单增李斯特菌prfA基因(bp)常规PCR检测试剂盒Mus musculus, mouseRabbit Anti-horse IgM/APC  APC标记的兔抗马IgM 分散蓝 35沙门氏菌生化鉴定试剂盒（SN）

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗马IgM 酰嘧磺隆沙门氏菌生化鉴定试剂盒（GB）

Collybia cookei (Bresadola) ArnoldRabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的兔抗马IgM 四唑嘧磺隆大肠埃希氏菌生化鉴定试剂盒

Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的兔抗马IgM 5-降冰片烯-2-甲醇肠道聚集性大肠埃希氏菌（EAEC）核酸快速检测试剂盒 PCR法

Fusarium oxysporum f. sp.fabae Yu et Fan ..Rabbit Anti-horse IgM/FITC  FITC标记的兔抗马IgM 锐劲特肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）核酸快速检测试剂盒 PCR法

Bordetella holmesii Weyant et al.Rabbit Anti-horse IgM/RBITC  罗丹明标记的兔抗马IgM (S)-(-)-1,1,2-三苯基-1,2-丁二醇2-醋酸酯产肠毒素/志贺毒素大肠埃希氏菌（ETEC/SETC）核酸快速检测试剂盒 PCR法

Penicillium marneffei Segretain et al.Rabbit Anti-horse IgM/HRP  辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgM 恶醚唑肠致病性大肠埃希氏菌（EPEC）核酸快速检测试剂盒 PCR法

Pseudallescheria boydii (Shear) McGinnis et ..Rabbit Anti-horse IgM/Bio  生物素标记的兔抗马IgM (R)-(+)-1,1,2-三苯基-1,2-乙二醇2-乙(醋)酸酯五种致泻性大肠埃希氏菌核酸快速检测试剂盒 PCR法